[发明专利]佐匹克隆中4-甲基哌嗪-1-甲酸酯类基因毒性杂质残留含量的测定方法

说明书

本发明公开了佐匹克隆中4‑甲基哌嗪‑1‑甲酸甲酯、4‑甲基哌嗪‑1‑甲酸乙酯、4‑甲基哌嗪‑1‑甲酸异丙酯残留含量的测定方法，包括以下步骤：配置对照溶液：精密称取4‑甲基哌嗪‑1‑甲酸甲酯、4‑甲基哌嗪‑1‑甲酸乙酯、4‑甲基哌嗪‑1‑甲酸异丙酯适量，至于容量瓶中用乙腈溶解、稀释，分别配成125ng/mL的限度浓度溶液；配置供试品溶液：精密称取佐匹克隆供试品适量，置于容量瓶中，用乙腈溶解、稀释，配成1mg/mL的溶液；样品测定：分别取供试品溶液和对照品溶液直接进样至GCMS，记录色谱图，按外标法，以峰面积计算，即得供试品中4‑甲基哌嗪‑1‑甲酸甲酯、4‑甲基哌嗪‑1‑甲酸乙酯、4‑甲基哌嗪‑1‑甲酸异丙酯的含量。

技术领域

本发明属于药物技术领域，涉及药物杂质检测领域，特别涉及佐匹克隆中4-甲基哌嗪-1-甲酸酯类基因毒性杂质残留含量的测定方法，所测定的基因毒性杂质为4-甲基哌嗪-1-甲酸甲酯、4-甲基哌嗪-1-甲酸乙酯、4-甲基哌嗪-1-甲酸异丙酯。

背景技术

佐匹克隆(zopiclone，ZOP)，化学名为6-(5-氯-2-吡啶基)-7-[(4-甲基哌嗪-1-基)羧基氧]-5，6-二氢吡咯并[3，4-b]吡嗪-5-酮，属于吡咯环酮类化合物，作为一种已用于临床的新型非苯二氮卓类镇静催眠药，能有效地用于失眠症的短期治疗。消旋佐匹克隆自80年代中期由法国罗纳普朗克.乐安(Rhone-Poulenc Rorer)公司以商品名IMOVANE及AMOBAN在欧洲等80多个国家上市，用于治疗睡眠紊乱。1999年忆梦返(IMOVANE)的销售额大约为1亿6千万美元，为美国市场外治疗睡眠紊乱的先导药物，未向FDA递交申请。Sepracor公司认为外消旋的短效催眠作用可能由于其(+)异构体所致，因此从1998年开始开发右佐匹克隆，至今已成功完成III期临床试验，2004年12月美国FDA已批准该药在美国上市。

右佐匹克隆是佐匹克隆的(S)-构型对映体，其制备工艺为：佐匹克隆经D-(+)-苹果酸拆分，得到中间体右佐匹克隆D-(+)-苹果酸盐，再经碱化脱除D-(+)-苹果酸得到右佐匹克隆粗品，最后精制得右佐匹克隆成品。右佐匹克隆的制备过程只是对佐匹克隆进行拆分，不涉及分子结构的改变，除手性异构体(R-佐匹克隆)、D-(+)-苹果酸、乙酸乙酯外，无特殊有机杂质引入。工艺中使用的无机试剂，均可被有效去除。

除立体构型不同外，佐匹克隆与右佐匹克隆的化学结构一致，佐匹克隆含有的杂质可能会引入右佐匹克隆中，佐匹克隆的合成工艺路线如下：

根据佐匹克隆生产工艺，佐匹克隆中可能含有的基因毒性杂质即4-甲基哌嗪-1-甲酸甲酯、4-甲基哌嗪-1-甲酸乙酯、4-甲基哌嗪-1-甲酸异丙酯，其也存在被引入右佐匹克隆的可能，因此对其残留情况的研究对于佐匹克隆以及右佐匹克隆的质量控制都具有重要意义。

然而，现有的佐匹克隆的法定标准中，尚未收载4-甲基哌嗪-1-甲酸甲酯、4-甲基哌嗪-1-甲酸乙酯、4-甲基哌嗪-1-甲酸异丙酯残留含量的检查方法，标准缺失，国内外均无相关文献报道，无法评价药品质量，存在安全隐患。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种佐匹克隆中4-甲基哌嗪-1-甲酸甲酯、4-甲基哌嗪-1-甲酸乙酯、4-甲基哌嗪-1-甲酸异丙酯残留含量的测定方法，本发明采用GCMS仪器检测，使用外标法对样品进行测定，分析其中的4-甲基哌嗪-1-甲酸甲酯、4-甲基哌嗪-1-甲酸乙酯、4-甲基哌嗪-1-甲酸异丙酯残留含量，该方法能够保证测试结果的准确性与可靠性。

本发明是通过以下技术方案实现的：

佐匹克隆中4-甲基哌嗪-1-甲酸甲酯、4-甲基哌嗪-1-甲酸乙酯、4-甲基哌嗪-1-甲酸异丙酯残留含量的测定方法，包括以下步骤：

对照溶液：精密称取4-甲基哌嗪-1-甲酸甲酯、4-甲基哌嗪-1-甲酸乙酯、4-甲基哌嗪-1-甲酸异丙酯，置于容量瓶中用乙腈溶解、稀释，分别配成对照溶液；