[发明专利]用于慢病毒载体长期存贮的组合试剂

说明书

本发明公开了一种用于慢病毒载体长期存贮的组合试剂，包含组分A和组分B，其中，组分A包含：蔗糖、磷酸二氢钾、七水合磷酸氢二钠和氯化钠；组分B包含：蔗糖、人血白蛋白、辛酸钠、N‑乙酰色氨酸钠、磷酸二氢钾、七水合磷酸氢二钠和氯化钠。本发明的临床级、低内毒病毒载体保存组合试剂，适用于GMP级的慢病毒载体的生产工艺，延长慢病毒保存的有效期，利于高纯度高品质的重组慢病毒载体制备工艺过程稳定，可进行线性放大，并可稳定、持续地改进生产工艺，有效控制成本，完善的生产工艺，并利于CAR‑T细胞产品的制备和临床使用。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种用于慢病毒载体长期存贮的组合试剂。

背景技术

病毒载体是目前最常用的基因导入方式之一。通过对病毒基因组的改造，使之携带外源目的基因和相关的病毒元件，并被包装成病毒颗粒。进而用病毒转染宿主，使携带的外源基因在宿主体内表达。

慢病毒(Lentivirus，简称LV)属于逆转录病毒科(Retrovidae)，为RNA病毒，由于这类病毒的一个重要特点是毒粒中含有依赖RNA的多聚酶即逆转录酶，故现名为逆转录病毒。慢病毒原发感染的细胞以淋巴细胞和巨噬细胞为主。由于其感染发病的潜伏期长，因此被称为慢病毒。例如人类免疫缺陷病毒(HIV)、猴免疫缺陷病毒(SIV)等。

慢病毒载体中研究最深入、应用最广泛的即是以人类免疫缺陷1型病毒(HIV-1)为基础发展起来的载体系统，能高效的将目的基因导入动物细胞。慢病毒基因组为正链RNA，其基因组进入细胞后，在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转为DNA，形成DNA整合前复合体，并可进入细胞核，将DNA整合到细胞基因组中进行转录和表达。

慢病毒载体与其他常用的病毒载体相比(如不能整合到染色体上的腺病毒载体，又如只能感染分裂期细胞且容量有限的逆转录病毒载体)，具有可以感染非分裂期细胞、容纳外源性基因片段大，可以长期表达等显著优点。

在制备嵌合抗原受体修饰T细胞(Chimeric Antigen Receptor T-Cell，简称CAR-T细胞)的工艺中，可通过慢病毒转导，将嵌合抗原受体基因整合到病人自体T细胞中，并经体外扩增最终得到临床使用的嵌合抗原受体T细胞注射液。

因此慢病毒载体的长期存贮的稳定性直接影响到临床免疫治疗的期限和经济效益。

发明内容

本发明的目的在于提供一种临床级、低内毒病毒载体保存组合试剂，用于慢病毒载体长期存贮。

本发明的第一方面，提供一种组合试剂，所述组合试剂包含组分A和组分B，

其中，组分A包含：蔗糖、磷酸二氢钾(KH₂PO₄)、七水合磷酸氢二钠(Na₂HPO₄-7H₂O)、氯化钠和水；

组分B包含：蔗糖、人血白蛋白、辛酸钠、N-乙酰色氨酸钠、磷酸二氢钾(KH₂PO₄)、七水合磷酸氢二钠(Na₂HPO₄-7H₂O)、氯化钠和水。

在另一优选例中，组分A中，蔗糖浓度为10-25g/100mL，磷酸二氢钾(KH₂PO₄)浓度为120-150mg/L，七水合磷酸氢二钠(Na₂HPO₄-7H₂O)浓度为700-850mg/L，氯化钠浓度为8500-10000mg/L。

在另一优选例中，组分A的pH为6.95-7.45，较佳为7-7.45或7.05-7.35。