[发明专利]多通道成像定量荧光免疫方法

权利要求书

1.多通道成像定量荧光免疫方法的检测装置，其特征在于：所述检测装置包括：数字相机(1)和试剂卡(6)，所述数字相机(1)为仪器级数字相机，所述数字相机(1)下端转动安装有镜头(2)，所述镜头(2)底部安装有滤色片(3)，所述镜头(2)底部转动安装有镜片固定架(4)，所述镜片固定架(4)底部设置有若干组LED激光灯(5)。

2.根据权利要求1所述的多通道成像定量荧光免疫检测装置，其特征在于：所述试剂卡(6)包括有侧视面板(61)，所述侧视面板(61)为塑料材质，所述侧视面板(61)左侧设置有加样区(62)，所述侧视面板(61)右侧设置有检测区(63)，所述检测区(63)等距离分布有若干组测试条(64)，所述加样区(62)中部设置有若干组加样口(67)。

3.根据权利要求1所述的多通道成像定量荧光免疫检测装置，其特征在于：所述测试条(64)设置有检测线(65)和质控线(66)。

4.多通道成像定量荧光免疫方法，其特征在于：所述检查装置的检测方法的步骤如下：

步骤一、荧光微球标记检测病毒抗体

用活化液替换原有保存液：离心－去上清－活化液超声重悬；加入EDC进行活化，EDC是个可溶于水的碳二亚胺，在酰胺合成中用作羧基的活化试剂，也用于活化磷酸酯基团、蛋白质与核酸的交联和免疫偶连物的制取；称取一定量的EDC，溶解后加入微球溶液中旋转反应15min；去除未反应或残余的反应物：离心－去上清－超纯水超声重悬，重复3次；用反应液超声重悬微球，然后加入一定量的待标记蛋白，避光反应1～4小时；去除未偶联的蛋白：离心－去上清－超声重悬，重复1～2次，2～8℃保存备用；

步骤二、制备包被有抗检测病毒抗体的免疫层析试纸条

将检测病毒抗体及羊抗鼠二抗喷涂在试剂卡(6)，具体是涂抹在加样区(62)，37℃干燥箱干燥过夜；

步骤三、制备洗脱液

将需要检测的人体鼻咽部拭子取样进行洗脱，洗脱液包括：表面活性剂1mM～3mM；缓冲液10mM～1M；数字相机蛋白酶抑制剂3mM～10mM；

步骤四、荧光免疫观察

取出所需免疫层析试纸条，室温放置15min；每孔加入50-70ull质控品，置于荧光检测仪孵育仓；15min后，打开数字相机(1)自动检测。

5.根据权利要求4所述的多通道成像定量荧光免疫方法，其特征在于：所述步骤二中将涂抹样品后试机卡(6)荧光微球标记抗检测病毒抗体偶联物喷在结合垫上，30℃真空干燥2h；加干燥剂于4～30℃密封保存。

6.根据权利要求4所述的多通道成像定量荧光免疫方法，其特征在于：所述步骤三中的表面活性剂为Tween镜头20，聚乙二醇辛基苯基醚缓冲液和十二烷基磺酸钠按照5:3:1的比例均匀混合后得到；所述缓冲液为磷酸盐溶液，三羟甲基氨基甲烷溶液或碳酸盐溶液。

7.根据权利要求4所述的多通道成像定量荧光免疫方法，其特征在于：所述步骤四中检测结果以校准品浓度为横坐标，发光值为纵坐标，采用四参数逻辑拟合法得到标准曲线方程，根据标准曲线方程计算待检样本中甲乙流感病毒检测含量。