[发明专利]一种全细胞转化制备葡萄糖二酸的方法

权利要求书

1.一种基因工程菌，其特征在于，该菌株是共同表达了假单胞菌菌株KENGFT3(Pseudomonas synxantha strain KENGFT3)来源的Udh(GenBank:CP014868.1)基因和脆弱假单胞菌P121(Pseudomonas fragistrain P121)来源的Udh(GenBank:CP013861.1)基因的大肠杆菌；所述大肠杆菌为BL21，或大肠杆菌XL1-Blue，或大肠杆菌Rosetta。

2.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于基因工程菌的构建方法为：将假单胞菌菌株KENGFT3(Pseudomonas synxantha strain KENGFT3)来源的Udh基因脆弱假单胞菌P121(Pseudomonas fragistrain P121)来源的Udh基因通过连接酶连接到表达载体上，表达载体在表达宿主中表达，所述表达载体为pETDuet-1，所述表达宿主为大肠杆菌，所述表达载体为pETDuet-1。

3.使用如权利要求1或2所述的基因工程菌进行全细胞转化制备葡萄糖二酸的方法，其特征在于，过程为：将大肠杆菌工程菌发酵培养，收集菌体，加入反应液进行全细胞转化，获得葡萄糖二酸。

4.如权利要求3所述的全细胞转化制备葡萄糖二酸的方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)种子培养：使用LB培养基对基因工程菌进行培养，获得种子液；

(2)高密度培养：以1-2％的接种量将种子液接种至发酵培养基内进行高密度培养，然后向其中加入诱导剂，继续培养，获得发酵液；

(3)收集细胞：将步骤(2)的发酵液离心，收集得到菌泥Ⅰ，将菌泥Ⅰ用Tris-Hcl进行洗涤、重悬后，再次离心，得到菌泥Ⅱ；菌泥Ⅱ为基因工程菌细胞；

(4)利用步骤(3)得到的细胞加入反应液，进行全细胞转化，生成葡萄糖二酸。

5.如权利要求4所述的全细胞转化制备葡萄糖二酸的方法，其特征在于，在步骤(1)中，基因工程菌的培养温度为37℃，培养时间为12h。

6.如权利要求4所述的全细胞转化制备葡萄糖二酸的方法，其特征在于，在步骤(2)中，基因工程菌的培养温度为37℃，当发酵液OD₆₀₀达到0.6～1.0时，添加诱导剂。

7.如权利要求4所述的全细胞转化制备葡萄糖二酸的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述诱导剂为IPTG，所述IPTG的添加量为0.4mM，诱导条件为：诱导温度为26℃，诱导时间为18h。

8.如权利要求4所述的全细胞转化制备葡萄糖二酸的方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述洗涤过程中使用的洗涤液为pH为7.5的25mM Tris-Hcl。

9.如权利要求4所述的全细胞转化制备葡萄糖二酸的方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述细胞的添加量为5～10g/L；所述反应液包括3-(N-吗啉基)丙磺酸(MOPS)和底物，其中，3-(N-吗啉基)丙磺酸(MOPS)的浓度为20.9g/L，底物的起始浓度为2g/L。

10.如权利要求4所述的全细胞转化制备葡萄糖二酸的方法，其特征在于，在步骤(5)中，所述反应液的pH为6.5～7.5；所述全细胞转化条件为：37℃条件下反应2～24h；所述底物为以葡萄糖醛酸或葡醛酸内酯。