[发明专利]一种基于竞争性单克隆抗体的旋毛虫病抗体检测试剂盒及其制备方法

说明书

一种基于竞争性单克隆抗体的旋毛虫病抗体检测试剂盒及其制备方法，属于荧光免疫检测技术领域。为了更快速、稳定、准确检测旋毛虫感染，本发明提供了一种基于竞争性单克隆抗体的旋毛虫病抗体检测试剂盒，试纸条包括样品垫、层析膜、吸水垫和底板，所述层析膜上设有检测线与质控线，其中检测线上喷涂有兔抗Ts‑WN10多克隆抗体，质控线上喷涂有兔抗鼠IgG；竞争性试剂含有杂交瘤细胞株WN10‑1H9所分泌的单克隆抗体Ts‑WN10‑1H9和重组抗原Ts‑WN10；所述杂交瘤细胞株WN10‑1H9的微生物保藏号是：CGMCC No.18316。本发明制备的试剂盒特异性及灵敏度高,可用于猪旋毛虫病的快速检测。

技术领域

本发明属于荧光免疫检测技术领域，具体涉及一种基于竞争性单克隆抗体的旋毛虫病抗体检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

旋毛虫病是一种危害非常严重的人兽共患病，其不但可给畜牧业生产造成巨大的经济损失，而且对人类身体健康也构成巨大威胁，人或动物主要通过生食或半生食含有旋毛虫的肉类(主要为猪肉)而发病。

对于屠宰动物旋毛虫病的检验，国际动物卫生组织(OIE)的法规检验方法为镜检法及集样消化法，目前我国也在延用这两种方法。然而以上两方法均存在一定的弊端，镜检法费时费力而且敏感性差，其敏感性为肉中虫体密度达到每克3条虫体时方可检出。集样消化法虽可大大提高检出率，将虫体检出率提高至每克肉1条虫体，但该方法仍十分繁琐，在发现阳性样品时仍需对阳性组采用消化法进行逐头检测。从敏感性的角度来看，由镜检法和集样消化法所造成漏检的肉类均存在安全隐患并可引起人类的感染(摄入75条虫体即可引起人的感染)。国内外学者对旋毛虫检测的方法进行了大量的研究，如应用间接荧光免疫试验，免疫酶染色试验，免疫印迹试验，免疫吸附试验(ELISA)等技术来检测旋毛虫抗体，但这些方法操作较复杂，常需要2-3个小时检测出结果，而且需要昂贵的仪器和专业技能人员在实验室完成，不能应用于现场和基层单位进行猪旋毛虫病的检测。目前，旋毛虫肌幼虫排泄分泌物ES抗原是OIE及国际旋毛虫委员会推荐的用于血清学抗体检测的标准抗原。然而ES抗原成分复杂，制备繁琐、生产周期长、批次质量不均，而且存在严重的诊断盲区(感染后19d前无法检出)和交叉反应等问题，因而阻碍了其实际应用。

本实验室对感染后6h的旋毛虫cDNA表达文库中进行了免疫学筛选，成功获得了一个高丰度强反应原性的抗原蛋白，命名为WN10，编码半胱氨酸蛋白酶抑制剂。WN10基因注册号：EU263325，蛋白注册号：ABY60755。

免疫层析试纸快速检测技术(ILFST)是在单克隆抗体技术、免疫层析技术、新材料及标记技术基础上发展起来的一种新型免疫学快速检测技术。免疫层析试纸条不需要专业技能和昂贵复杂的仪器设备，快速性、易用性、低成本和无需设备性等优点，是理想的免疫学快速检测技术之一。常规的免疫标记是用胶体金对抗体或抗原进行标记，但由于胶体金检测在灵敏度和准确度上的限制，只能用于一些要求低的检测项目中。近年来，荧光免疫标记试纸条取得了较大发展。目前已报道的旋毛虫病抗体检测试纸条方法中，包括有胶体金试纸条和时间分辨荧光微球试纸条，且均采用肌幼虫排泄分泌物ES抗原。竞争性单克隆抗体具有与抗原结合的特异性强、纯度好、重复性强、便于质量控制、亲和力好且可大量的生产优势，因而建立一种基于竞争性单克隆抗体的旋毛虫病抗体诊断荧光试纸条，对旋毛虫病的诊断方法的改进具有重要的意义。

发明内容

为了更快速、稳定、准确检测猪旋毛虫感染情况，本发明提供了一种基于竞争性单克隆抗体的旋毛虫病抗体检测试剂盒及其制备方法，具体技术方案如下：

一种基于竞争性单克隆抗体的旋毛虫病抗体检测试剂盒，所述旋毛虫病抗体检测试剂盒含有试纸条和竞争性检测试剂；所述试纸条包括样品垫、层析膜、吸水垫和底板，所述层析膜上设有检测线与质控线，其中检测线上喷涂有兔抗Ts-WN10多克隆抗体，质控线上喷涂有兔抗鼠IgG；所述竞争性试剂含有杂交瘤细胞株WN10-1H9所分泌的单克隆抗体Ts-WN10-1H9和重组抗原Ts-WN10；所述杂交瘤细胞株WN10-1H9的微生物保藏号是：CGMCCNo.18316。