[发明专利]一种检测胰腺癌患者外周血循环肿瘤细胞PD-L1表达的免疫荧光试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及一种检测胰腺癌患者外周血循环肿瘤细胞PD‑L1表达的免疫荧光试剂盒及检测方法，属于分子生物学技术领域。本发明提供了一种胰腺癌患者外周血循环肿瘤细胞PD‑L1表达非诊断目的的检测方法，利用膜过滤装置分离获得无法获取组织标本的晚期或复发胰腺癌患者外周血中的CTC，进一步运用免疫荧光技术检测CTC的PD‑L1表达情况。本发明提供的检测方法，不用穿刺活检获取组织标本即可检测到晚期或复发胰腺癌患者PD‑L1表达情况。该技术属于微创，并能够实时检测；能够避免染色过程中可能产生的边缘效应导致的假阳性结果，稳定性好，降低细胞的损失，提高检测的准确性。

技术领域

本发明涉及一种检测胰腺癌患者外周血循环肿瘤细胞PD-L1表达的免疫荧光试剂盒及检测方法，属于分子生物学技术领域。

背景技术

胰腺癌是消化系统常见的恶性肿瘤，也是预后最差的恶性肿瘤之一，在恶性肿瘤所导致的死亡中，胰腺癌排第四位，90％患者在确诊后一年内死亡，5年生存率不足10％。由于胰腺癌早期症状隐匿，且没有特异性，侵袭性强，转移早，手术切除率低，确诊时病情多处于中晚期，对其治疗目前基本是全身化疗治疗。

循环肿瘤细胞（Circulating tumor cell，CTC）是从实体肿瘤脱落进入外周血液循环的肿瘤细胞，自1989年被发现以来，目前已有多种方法用于外周血循环肿瘤细胞的检测。近期研究表明，其检测对于评估肿瘤患者尤其是晚期肿瘤患者的预后以及选择合适的个体化治疗具有重要的临床意义。因CTC检测具有微创、实时检测等特点，被称为肿瘤的“液体活检”。

最新研究表明，晚期胰腺癌化疗联合免疫治疗疗效可能有一定的提高，但PD-1抑制剂疗效肿瘤细胞PD-L1表达相关；由于胰腺属于腹膜后位脏器，胰腺肿瘤穿刺活检面临出血、胰瘘、感染等风险，亦不能实时动态检测PD-L1表达状态，因此对晚期胰腺癌患者外周血中基于循环肿瘤细胞PD-L1检测对胰腺癌免疫联合化疗治疗具有重要临床指导意义，使部分患者避免不必要的手术创伤及穿刺风险。

目前，山东省第一医科大学、山东省药物研究院联合山东祺欣生物科技有限公司、山东喻晓生物科技有限公司、济南杏恩生物科技有限公司、山东发现生物技术有限公司等单位，对于循环肿瘤细胞检测鉴定关键技术进行产业化推广的研究，本项目为山东省重大科技创新工程项目，本项目将以山东第一医科大学济南校区的山东省药物研究院为核心，落实注册人制度，依托循环肿瘤细胞检测鉴定核心诊断技术，进一步注册鉴定诊断试剂盒，以包括PD1、PD-L1、ER、PR、Her-2、GPC-3、VEGF、P53、Vimentin、TKI-EGFR、RAS、CK、ALK-D5F3、CD20、ALK/EML4、Beta-catenin、E-Cadherin、EP-CAM、HPV、IDH-1、PSA、PSMA、VEGF、GFAP、细胞角蛋白、AE1/AE3、雌激素受体、孕激素受体、BCA-225、CA 125、CEA、EMA、ERCC1、HPV、Ki-67、P53、TOP2A等作为CTCs表达的示踪剂，注册超灵敏、超快速、高覆盖、低成本、准确特异的鉴定诊断试剂盒，通过与在济南注册的山东祺欣生物科技有限公司、山东喻晓生物科技有限公司、济南杏恩生物科技有限公司、山东发现生物技术有限公司合作进行产业化推广。

发明内容

为了解决实时动态检测PD-L1表达的问题，同时避免穿刺活检面临出血、胰瘘、感染等风险，本发明提供了一种胰腺癌患者外周血循环肿瘤细胞PD-L1表达非诊断目的的检测方法，利用膜过滤装置分离获得无法获取组织标本的晚期或复发胰腺癌患者外周血中的CTC，进一步运用免疫荧光技术检测CTC的PD-L1表达情况。

本发明采用的技术方案如下：