[发明专利]一种测定Beagle犬血浆中羟基酪醇的方法

说明书

本发明涉及一种测定Beagle犬血浆中羟基酪醇的方法，属于生物检测领域。该方法采用甲苯磺丁脲为内标，乙腈沉淀蛋白处理后，采用高效液相色谱法‑电喷雾离子化串联质谱法来检测羟基酪醇在Beagle犬血浆样品中的浓度。本发明方法在准确度、精密度、专属性、稳定性、提取回收率及基质效应等方面均达到了中国药典2015年版以及NMPA2014年颁布的《化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则》对生物样品分析的要求。

技术领域

本发明涉及一种测定Beagle犬血浆中羟基酪醇的方法，属于生物检测领域。

背景技术

羟基酪醇(hydroxytyrosol，HT)，化学名称为3,4-二羟基苯乙醇，是存在于橄榄叶和橄榄油中的天然多酚类成分，具有体外抗氧化作用，常用于保健品和食品添加剂。最近研究表明，羟基酪醇具有抗癌、抗菌、抗炎、抗氧化、保护心脏等多种有益于人体健康的药理活性，其药用价值亟待开发，对羟基酪醇的成药性研究和临床研究将是未来主要研究方向。而对羟基酪醇成药性评价的临床前研究涉及不同种属实验动物的药代/毒代动力学研究，因此针对各类生物样本建立快速、灵敏、专属性强的羟基酪醇分析检测方法十分必要。

目前关于羟基酪醇的体内分析方法较少，针对不同生物基质开发的分析方法也不相同。例如文献1(杨茜.LC-MS/MS法研究羟基酪醇对甲苯磺酸酯药代动力学及组织分布[D],唐山:华北理工大学,2019.)公开了一种测定大鼠血浆及组织中羟基酪醇的LC-MS/MS方法并成功应用于羟基酪醇前体药物大鼠体内药代动力学及组织分布研究；文献2(PieroDel Boccio,Antonietta Di Deo,Amalia De Curtis,etal.Liquid chromatography-tandem mass spectrometry analysis of oleuropein and its metabolitehydroxytyrosol in rat plasma and urine after oral administration[J].JChromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci,2003,785(1):47-56.)公开了LC-MS/MS测定大鼠血浆及尿液中环烯醚萜苷及其生物活性代谢物羟基酪氨酸的定量方法；此外对于人服用橄榄油后血浆中羟基酪醇的含量测定也有相关报道(Pastor A,Rodríguez-Morató,Jose,etal.Analysis of free hydroxytyrosol in human plasma following theadministration ofolive oil[J].Journal ofChromatographyA,2016:183-190.)。而对于Beagle犬血浆中羟基酪醇的含量测定方法尚未见文献报道，由于羟基酪醇极易被氧化，稳定性差，药代动力学研究要求的生物分析方法必须灵敏准确，本发明首次建立了利用LC/MS/MS测定Beagle犬血浆中羟基酪醇的检测方法，为羟基酪醇的临床前研究奠定了坚实的生物分析基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种Beagle犬血浆中羟基酪醇的检测方法。

本发明的测定Beagle犬血浆中羟基酪醇的方法，其包括采用高效液相色谱法-电喷雾离子化串联质谱法即HPLC-MS-MS法来检测Beagle犬血浆中羟基酪醇的浓度。

本发明所述的测定Beagle犬血浆中羟基酪醇的方法，其具体包括如下步骤：

(1)血浆样品处理：100μL血浆样品置于1.5mL离心管中，加入10μL甲苯磺丁脲内标溶液及500μL乙腈溶液，涡旋2min，13000rpm(8℃)离心5min，取上清液作为待测液；