[发明专利]一种香樟组织培养过程中提高再生效率的方法

权利要求书

1.一种香樟组织培养过程中提高再生效率的方法，其特征在于，先对香樟种子进行消毒，并使消毒后种子萌发以获得香樟无菌苗；接着，以所述香樟无菌苗的幼嫩茎段作为外植体，并经过“芽的诱导”、“芽的增殖”、“芽的生根”步骤建立相应的香樟组织培养方法；其中，所述“芽的增殖”步骤中使用的“增殖培养基”以及“芽的生根”步骤中使用的“生根培养基”中均分别添加活性炭作为附加成分，并且，建立的香樟组织培养方法具体如下：

(1)外植体的获得与消毒：

①选取颗粒饱满的香樟种子，将其浸泡到无菌水4h，然后在超净工作台上用利用75％酒精漂洗15s，重复3次，接着用1％次氯酸钠浸泡5min，最后用无菌水冲洗5次；冲洗完毕，用无菌吸水纸将种子上的水分吸干备用；

②将吸干水分的香樟种子接种至无菌苗培养基中进行培养，以获得香樟无菌苗；其中，所述无菌苗培养基的配方为：MS，pH 5.8；

(2)芽的诱导：

将培养25-35天的香樟无菌苗的幼嫩茎段作为外植体，并切成0.5-0.6cm大小；接着，再将其接种于含诱导培养基的培养瓶中进行不定芽的诱导；其中，所述诱导培养基的配方为：MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA，pH 5.8；

(3)芽的增殖：

将步骤(2)得到的新芽分割成单株，并分别接种至增殖培养基中进行增殖培养；其中，所述增殖培养基的配方为：MS+3mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+2g/L活性炭，pH 5.8；

(4)芽的生根：

当香樟芽苗长至3cm高时，将其接种到生根培养基中进行生根培养；其中，所述生根培养的配方为：1/2MS+0.5mg/L IBA+0.3mg/L NAA+2g/L活性炭，pH5.8。

2.根据权利要求1所述的香樟组织培养过程中提高再生效率的方法，其特征在于，所述香樟种子选自生长健壮、干形通直、树冠端正、无病虫害、处于壮龄，且耐水淹的优良单株的香樟植株。

3.根据权利要求1所述的香樟组织培养过程中提高再生效率的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，将吸干水分的香樟种子接种至含无菌苗培养基的培养瓶中进行培养，每瓶接种2粒种子，3周后观察，共接50瓶，重复三次试验，并统计香樟种子发芽率及其污染率。

4.根据权利要求1所述的香樟组织培养过程中提高再生效率的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，将培养30天的香樟无菌苗的幼嫩茎段作为外植体，并切成0.55cm大小；接着，再将其接种于含诱导培养基的培养瓶中进行不定芽的诱导。

5.根据权利要求1所述的香樟组织培养过程中提高再生效率的方法，其特征在于，所述步骤(1)、步骤(2)、步骤(3)和步骤(4)中，无菌苗培养、芽的诱导培养、芽的增殖培养与芽的生根培养的具体培养条件为：培养温度(25±1)℃，光照时间14-16h/d，光照强度1500-2000Lx。

6.根据权利要求1-5任一所述的香樟组织培养过程中提高再生效率的方法，其特征在于，所述香樟组织培养方法中“芽的生根”步骤后还包括“炼苗移栽”步骤：

通过逐步开盖的方式将“芽的生根”步骤获得的试管苗放置在无菌组培室内驯化一周，并将无菌水倒入相应培养瓶中以保持水分；一周过后，将试管苗取出，并用流水将附着在试管苗根部的培养基清洗干净，接着将其移栽于灭菌处理好的培养基质中；放其置于室内，浇透水，并用塑料薄膜覆盖在其周围，定期浇水，并保证一周后减少浇水次数；4d后将塑料薄膜移开至完全拆除，7d后移出培养室，使其于自然光下进行生长；其中，所述培养基质的组成为黑土：珍珠岩＝1:3。