[发明专利]靶向AQP4基因的RNA干扰表达载体构建及应用

权利要求书

1.一种靶向大鼠AQP4基因的RNA干扰表达载体，其特征在于：所述RNA干扰表达载体的序列包括根据大鼠AQP4基因序列设计的能够产生干扰AQP4蛋白表达的siRNA的DNA片段。

2.权利要求1所述的靶向大鼠AQP4基因的RNA干扰表达载体的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：

①小分子干扰AQP4-siRNA序列设计

通过Gene Bank获取大鼠的AQP4mRNA序列，Gene ID：612628，按照基因设计原则设计备选的AQP4-siRNA，通过预实验选出最佳序列。根据每条AQP4-siRNA序列设计2条互补的DNA模板单链，包括正义链和反义链，中间以10个脱氧核苷酸所形成的环结构相连，后面接有RNA polyⅢ聚合酶转录中止位点，同时模板两端分别设计BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切点，并以绿荧光蛋白(GFP)为阳性对照，以Scramble Ⅱ为阴性对照；

②构建表达AQP4-siRNA的质粒载体

合成2条单链DNA模板，取等量的DNA模板合成片断经退火生成双链DNA，4％琼脂糖核酸电泳，纯化电泳产物，将获得的双链DNA与载体片断连接，合成含AQP4-siRNA的质粒载体，并对比不同载体转染效果。

3.根据权利要求2所述的靶向大鼠AQP4基因的RNA干扰表达载体的构建方法，其特征在于：步骤②中所述的双链DNA连接的载体是慢病毒、脂质体或逆转录病毒中的一种。

4.权利要求1所述的靶向大鼠AQP4基因的RNA干扰表达载体应用于制备治疗大鼠脑损伤的制剂。

5.权利要求1所述的靶向大鼠AQP4基因的RNA干扰表达载体应用于研究AQP4在机体疾病发生中的作用。