[发明专利]一种通用型供临床多次回输异体DNT细胞的高效体外扩增方法

权利要求书

1.一种通用型DNT细胞的体外扩增方法，其特征在于，包括步骤：

(i)提供一获自供体的外周血起始样品I；

(ii)去除起始样品中的CD4⁺和CD8⁺T细胞，从而获得样品II；

(iii)在含有适合DNT细胞生长培养基的培养体系中，培养样品II，从而获得样品III；其中，所述培养体系中包括固定的T细胞促分裂原；

(iv)在含有适合DNT细胞生长培养基的培养体系中，培养样品III，从而获得样品IV；其中，所述培养基中含有浓度为30-80ng/mL(较佳地40-60ng/mL，更佳地50ng/mL)的可溶性T细胞促分裂原；

(v)在含有适合DNT细胞生长的培养基的培养体系中，培养样品IV，其中，所述培养基中含有浓度为15-40ng/mL(较佳地20-30ng/mL，更佳地25ng/mL，更佳地为亚步骤(va)中所述T细胞促分裂原的添加量的1/2)的可溶性T细胞促分裂原，从而获得所需量的通用型DNT细胞，为样品V；和

(vi)在含有适合DNT细胞保存的溶液体系中，收集样品V；其中，所述溶液中含有人血白蛋白，从而获得临床使用的通用型DNT细胞，为DNT细胞制剂；

其中，所述步骤(iii)至(v)的培养体系中均含有200-1000IU/mL(较佳地为300-700IU/mL，更佳地为500IU/mL)的重组人白介素2，并且均不含有重组人白介素4，并且均不含AB血清。

2.如权利要求1所述的体外扩增方法，其特征在于，所述样品II是冻存后复苏的细胞溶液。

3.如权利要求1所述的体外扩增方法，其特征在于，在所述步骤(iii)至(v)的培养基中，还包括选自下组的细胞因子：IL-7、IL-12、IL-15，或其组合。

4.如权利要求1所述的体外扩增方法，其特征在于，所述T细胞促分裂原选自下组：结合CD3的抗体、凝集素、能够刺激DNT细胞扩增的化合物，或其组合。

5.如权利要求1所述的体外扩增方法，其特征在于，在所述步骤(iii)中，培养体系中待扩增的DNT细胞的初始浓度为1×10⁶至4×10⁶个细胞/mL。

6.如权利要求1所述的体外扩增方法，其特征在于，在步骤(iv)中，还包括检测DNT细胞表型和活率。

7.如权利要求1所述的体外扩增方法，其特征在于，在步骤(iv)中，还包括检测DNT细胞表型和活率。

8.如权利要求1所述的体外扩增方法，其特征在于，在步骤(vi)中，包括步骤：

(via)离心收集样品V中的DNT细胞；

(vib)以含2.5％人血白蛋白的生理盐水(或“溶媒”)洗涤DNT细胞；和

(vic)以含2.5％人血白蛋白的生理盐水(或“溶媒”)将DNT细胞调整为1×10⁸个细胞/mL的浓度。

9.一种有效量的如权利要求1所述的方法获得的DNT细胞的用途，其特征在于，用于制备一药物组合物或制剂，所述药物组合物或制剂用于：

(a)预防和/或治疗肿瘤；

(b)预防和/或治疗感染性疾病；

(c)预防和/或治疗自身免疫性疾病；

(d)预防和/或治疗变态反应；

(e)预防和/或治疗移植物抗宿主疾病；和/或

(f)调节免疫应答。

10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述肿瘤为与所述DNT细胞异体的肿瘤。