[发明专利]一种活性十肽及其在制备保护听觉毛细胞产品中的应用

权利要求书

1.一种活性十肽，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种提取权利要求1所述活性十肽的方法，其特征在于，步骤如下：

（1）将脉红螺去壳后，取全部软体组织部分，磨碎，然后加入软体组织重量1～10倍的酸溶液，酸溶液pH值1.0～4.0，然后加入软体组织重量5～20%的胃蛋白酶，35～40℃条件下振荡酶解1～5h，然后调pH值至7.0～9.0，加入软体组织重量5～20%的胰蛋白酶和糜蛋白酶，35～40℃条件下振荡酶解1～5 h，离心，取上清液，然后经浓缩、冻干，制得脉红螺多肽提取物；

（2）将步骤（1）制得的脉红螺多肽提取物用缓冲盐溶液复溶，用葡聚糖凝胶G25进行柱分离，pH值6.0～8.0 缓冲盐溶液为洗脱剂，洗脱5个柱体积，收集第3～5柱体积馏分，冻干，干粉盐水溶解，以Sephadex LH-20进行分离，以盐水为洗脱剂，按照10 mL/45min的速度收集样品，每45 min收集一份，将第14～20份的活性段洗脱液合并，经浓缩，制得多肽活性段粗提物；

（3）将步骤（2）制得的多肽活性段粗提物用浓度10mM、pH5.8～6.2的乙酸铵缓冲液溶解，经4.5 μm微孔膜过滤，然后经Welch HILIC Amide柱分离，二元流动相为乙腈和浓度10mM、pH5.8～6.2的乙酸铵缓冲液，乙腈与乙酸铵缓冲液的体积比为85:15，流速为0.8ml•min^-1，收集210nm处具有体外DPPH自由基清除活性的吸收峰的洗脱液，鉴定确定氨基酸组成，冻干，制得具有抗氧化应激损伤功能的活性十肽。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，胃蛋白酶酶解pH值2.0～3.0，胰蛋白酶和糜蛋白酶酶解pH值为7.2～8.0。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，pH调节剂为盐酸和氢氧化钠。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，所述胰蛋白酶与糜蛋白酶的酶活比例为1：（0.2～5）。

6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，缓冲盐体系为磷酸盐缓冲体系，pH值6.8～7.2。

7.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）中，鉴定确定氨基酸组成采用LC-MS蛋白鉴定技术。

8.权利要求1所述活性十肽作为药效成分在制备治疗耳部疾病药物中的应用，其特征在于，所述耳部疾病为因听觉毛细胞受损导致的耳部疾病。