[发明专利]一种快速提取和检测土壤中香草硫缩病醚的方法

说明书

本发明提供了一种快速提取和检测土壤中香草硫缩病醚的方法，涉及环境检测领域土壤中香草硫缩病醚测定的前处理和检测方法领域。本方法采用四步提取法、高效液相色谱(HPLC)检测技术来快速提取和检测土壤中的香草硫缩病醚，旨在为香草硫缩病醚在沉积物、植物中等其它相关领域的研究提供技术支持。所述方法包括：提取方法：取土壤样品，通过四步提取法分步提取，按照极性由大到小，依次是CaCl₂水溶液、乙腈：水＝9：1溶液、甲醇、二氯甲烷。每步提取先涡旋，再摇床，超声，离心，取上清液。检测方法：四步提取液经萃取、旋蒸、氮吹浓缩后过滤膜定容，之后进样入HPLC定量分析。

技术领域

本发明涉及土壤中香草硫缩病醚快速提取和检测的技术领域，具体涉及一种快速提取和检测土壤中香草硫缩病醚的方法。

背景技术

植物病毒病发病率很高，每年都会对世界农业和园艺造成相当大的经济损失。马铃薯Y病毒(PVY)和黄瓜花叶病毒(CMV)是重要的植物致病菌。可感染各种各样的农作物，如土豆、黄瓜、烟草、辣椒、烟草等多种经济作物和观赏花卉，这种危害影响日趋明显。但是蚜虫对植物接种PVY和CMV的速度非常快，目前能有效的防治这两种病毒的药剂尚无。近年来,宁南霉素、毒氟磷、利巴韦林广泛用于植物病毒的防治，但是它们仍存在药效低、易降解,成本高或者毒性高、抗性大等问题。因此，寻找一种新型、高效、环境友好的抗植物病毒剂农药是很有必要的。通过大量的试验研究，由贵州大学绿色农药与农业生物工程国家重点实验室培育基地自主创新的一种抗植物病毒药剂-香草硫缩病醚应运而生了。

Jian Zhang等人用半叶枯斑法，在500μg/L浓度下对目标化合物的抗病毒活性进行测试，测试结果表明，香草硫缩病醚表现出很好的抗PVY和CMV治疗和保护活性,其EC50值分别为217.64μg/mL，205.74μg/mL和206.34μg/mL，186.2μg/mL，显著优于其它抗病毒药剂病毒唑(848.0μg/mL，808.1μg/mL和858.2μg/mL，766.5μg/mL)、毒氟磷(462.6μg/mL，454.8μg/mL和471.2μg/mL,465.4μg/mL)、宁南霉素(440.5μg/mL,425.3μg/mL和426.1μg/mL,405.3μg/mL)。以上研究说明香草硫缩病醚在控制花叶病毒方面有显著效果，具有很好的应用前景。

农药在使用后，少部分会直接作用于目标物上，大部分都散落在土壤中，所以土壤是农药残留相关领域中一个非常重要的基质，但是土壤中农药含量一般是很低的，这就需要发展有效的分析方法来监测土壤中的农药。香草硫缩病醚作为一种新型农药，对土壤环境的检测方法乃至其潜在影响未见报道。根据农药管理部门的要求,必须对新型农药在土壤生态系统中的环境行为和归趋进行系统深入的研究，进而对农药的安全性做出科学的评价，确保农药对环境和产品的安全性，科学的避免或控制农药对坏境的污染已成为我国亟待解決的主要环境问题之一。由于土壤基质过于复杂，影响因素多元，一般采用普通的技术难以快速准确地提取、定量土壤中香草硫缩病醚的含量，而本发明中的四步提取法、HPLC检测方法能够快速高效回收、定量目标物，使得最终的检测工作更为科学可靠。

发明内容

本发明提供了一种不同土壤中香草硫缩病醚含量的提取和检测方法，综合利用四步提取法提取，旋蒸、氮吹浓缩，HPLC定量分析来研究土壤中香草硫缩病醚含量的测定，以便研究该药在土壤环境中的行为和归趋。

本发明的技术方案是：

一种快速提取和检测土壤中香草硫缩病醚的方法，包括以下步骤：

1)提取：取每次取样点含香草硫缩病醚的土壤样品，通过四步提取法分步提取，按照极性由大到小，依次采用CaCl₂水溶液提取、乙腈和水的混合液提取、甲醇提取和二氯甲烷提取，得到第四步提取样品；

2)检测：第四步提取样品经旋蒸、氮吹浓缩后过有机滤膜定容，之后进HPLC检测，利用外标法定量分析，得到的结果与标准曲线比对，得到土壤中香草硫缩病醚的量。