[发明专利]全面检测非HLA类供者特异性抗体的纯化抗原法

说明书

本发明提供了一种全面检测非HLA类供者特异性抗体(DSA)的纯化抗原法，通过对移植物供者或潜在供者的组织细胞抗原进行分离纯化，并固定到固相载体，在其中的HLA类抗原被特异性抗体或其类似物封闭的基础上，建立了一个在大多数非HLA类抗原未知的情况下，也可以全面检测非HLA类DSA的检测方法。

技术领域

本发明属于抗体检测技术领域，涉及全面检测非HLA类供者特异性抗体的纯化抗原法。

背景技术

在器官、组织、和非自体的(造血)干细胞移植中，移植物受者产生的针对供者移植物抗原的抗体被称为供者特异性抗体(Donor Specific Antibody，DSA)， DSA是导致抗体介导的排斥反应主要原因并作为确诊用必须指标被写入了 BANFF国际诊断标准。

移植病人产生的DSA，根据其所针对的靶抗原，被分为HLA类DSA和非 HLA类DSA两类。人类白细胞抗原HLA(Human Leukocyte Antigen，HLA)是最早被发现的、具有人群多态性的移植排斥相关抗原。非HLA类抗原的品类非常繁多，其中包括各类组织特异性的抗原，如血小板特异性抗原，内皮细胞表面特异性抗原等等。尽管已经有上万种HLA类抗原被人类发现，但遗憾的是，目前为止被发现的非HLA类抗原仍然非常有限的。

临床研究指出，在HLA没有错配的供受者之间进行移植时，也就是说，在没有HLA类DSA的作用的情况下，仍然有很多病人最终因非HLA类DSA导致移植物失去功能，其比例甚至超过HLA(Current Opinion in Immunology 2005， 17:541-545；Lancet 2005；365：1570-76)。类似的大量证据都说明了非HLA类抗原的现实存在。遗憾的是，在已有的科学研究中，被明确发现的、和移植排异相关的非HLA类抗原却很少，绝大多数仍然未知。

由于我们对抗体的检测是根据免疫学抗原和抗体相互作用的原理，因此，在通常情况下，要检测非HLA类DSA，必须要有纯化的、已知的非HLA类抗原，作为检测用材料。由于目前被发现的和移植排异相关的非HLA类抗原非常少，所以我们能检测到的非HLA类DSA极为有限，大量未知的非HLA类DSA无法被明确地检出。

尽管我们已经确知非HLA类DSA能够引起排斥反应，而且其重要性甚至超过HLA类DSA，但是我们对非HLA类抗原的品类和数量却尚不完全明了。目前已有的相关检测，也只是针对个别已经被发现的非HLA抗原做相应的抗体检测，比如用纯化的MICA抗原检测相应的MICA抗体。在这种大量非HLA类抗原未知的情况下，如何检测非HLA类DSA是移植检验中一个亟待解决的问题。

在针对如何全面检测非HLA类DSA的技术探索中，我们先后提出了以下两种方法，发明的具体内容和优缺点概括如下：

1)用于检测同种异体的、或供者特异性的非HLA抗体的方法(专利申请号202010074999.X)

本发明利用供者或潜在供者来源的组织细胞为原材料，分离、提纯出靶细胞表面包含HLA和所有非HLA类抗原的混合物。通过对纯化的混合抗原中HLA类抗原的清除处理，剩余的含有非HLA类抗原的混合物作为检测用材料，通过常规的固相载体包被技术，检测相应的非HLA类抗体。

该检测技术的优点：本检测方法既解决了目前以细胞为基础的同种异体的、或供者特异性的抗体检测技术中，由于HLA类抗原和非HLA类抗原在靶细胞的共表达导致无法直接区分HLA和非HLA抗体的缺点；也解决了以纯化抗原为基础的抗体检测技术中，纯化的HLA抗原只能检出相应的HLA 抗体、纯化的特定非HLA抗原只检测特定非HLA抗体的缺点。

该检测技术的缺点：该技术方案操作流程复杂，费时较长。

2)全面检测非HLA类供者特异性抗体的细胞学方法(专利申请号202010269772.0)