[发明专利]全面检测非HLA类供者特异性抗体的纯化抗原法

权利要求书

1.全面检测非HLA类供者特异性抗体的纯化抗原法，包括如下步骤：

1)对检测用原材料中的混合抗原进行分离、纯化；

2)将步骤1)纯化好的含有HLA和非HLA类的混合抗原，结合到固相载体表面；

3)对固相载体表面包被的HLA进行封闭后，用于检测被检样本中结合到固相载体的非HLA类供者特异性抗体。

2.根据权利要求1所述的全面检测非HLA类供者特异性抗体的纯化抗原法，其特征在于，步骤1)中，检测用原材料的来源包括：移植物供者或潜在供者来源的器官、组织、细胞或其组分，或上述细胞经体外分离、培养、扩增后的细胞。

3.根据权利要求1所述的全面检测非HLA类供者特异性抗体的纯化抗原法，其特征在于，步骤2)中，所述固相载体包括：塑料平板，微颗粒和膜载体。

4.根据权利要求1所述的全面检测非HLA类供者特异性抗体的纯化抗原法，其特征在于，步骤2)还包括对包被了混合抗原的固相载体表面可能存在的未吸附位点进行封闭。

5.根据权利要求4所述的全面检测非HLA类供者特异性抗体的纯化抗原法，其特征在于，用于封闭固相载体表面可能存在的未吸附位点的溶液包括：血清白蛋白，或小牛血清。

6.根据权利要求1所述的全面检测非HLA类供者特异性抗体的纯化抗原法，其特征在于，步骤3)中，用HLA特异性抗体或者已被证实能和HLA分子结合的其他类似物对固相载体表面包被的HLA进行封闭。

7.根据权利要求6所述的全面检测非HLA类供者特异性抗体的纯化抗原法，其特征在于，所述HLA特异性抗体选自完整抗体或抗体的片段；单克隆或多克隆抗体；单一的抗体或者两个以上抗体的组合；人源性的、动物源性的、或重组抗体。

8.根据权利要求1所述的全面检测非HLA类供者特异性抗体的纯化抗原法，其特征在于，步骤3)还包括：在HLA封闭反应完成后，用已知具有HLA特异性的单克隆、多克隆抗体、或抗体的组合，来确认HLA被封闭后的固相载体表面无法再结合HLA抗体。

9.根据权利要求1所述的全面检测非HLA类供者特异性抗体的纯化抗原法，其特征在于，步骤3)中，所述被检样本来源于器官、组织，和干细胞移植受者的体液、移植器官或组织的灌洗液、或洗脱液。

10.根据权利要求1所述的全面检测非HLA类供者特异性抗体的纯化抗原法，其特征在于，步骤3)中，检测被检样本中结合到固相载体的非HLA类供者特异性抗体的方法包括：

a.抗抗体的标记二抗检测法，包括：

结合到固相载体的非HLA类供者特异性抗体，在加入能识别被检样本中抗体的类型或其亚型的标记二抗后，根据标记二抗所带的特异性标记物，通过显色被检出；

b.抗补体的标记二抗检测法，包括：

结合到固相载体的非HLA类供者特异性抗体中，对于能激活补体的部分抗体，通过依次或同时加入补体以及抗补体的标记二抗的方法检出；阳性结果根据标记二抗所带的特异性标记物，通过显色被检出。