[发明专利]一种含免疫调节肽功能成分的LGG发酵产物的制备方法及其应用

说明书

本发明提供了一种含免疫调节肽功能成分的LGG发酵产物的制备方法及其应用，采用鼠李糖乳杆菌LGG作为单一的发酵菌株，包括步骤：a.发酵底物的预处理步骤；b.碳源添加步骤；c.营养因子添加步骤；d.均质灭菌步骤；e.接种步骤；f.发酵、后酵步骤；g.后处理步骤，获得含有氨基酸系列为Thr‑Thr‑Met‑Pro‑Leu‑Trp的免疫调节肽、氨基酸系列为Tyr‑Pro‑Phe‑Pro的类吗啡肽、P40蛋白、P75蛋白等功能性成分的发酵物液体或粉末，可广泛应用于新鲜或热处理各类食品、保健品、特医食品、甚至药品中，提升其健康价值，改善食用者健康水平。

技术领域

本发明属于使用益生菌发酵产生功能性成分，具体涉及一种益生菌发酵产生免疫调节肽、类吗啡肽和功能蛋白的制备方法及其应用。

背景技术

近年来，继提出益生菌(probiotics)、益生元(prebiotics)和合生元(synbiotics)等概念后，益生菌界又提出了postbiotic(译为后生元)一词。Postbiotic是益生菌产生的、可对宿主发挥益生作用的代谢产物，包括多肽、分泌蛋白、脂肪酸、磷壁酸、胞外多糖、细菌素等。目前，解析postbiotic的益生作用已成为益生菌研究领域的热点，在该方面研究得较为深入的是乳酸菌的postbiotic。某些乳酸菌的代谢产物有着类似于活菌本身的益生作用，可在多个层面上保护肠道屏障功能。

目前研究发现的主要功能：

1、抑制细菌生长：抑菌类产物是益生菌代谢产物中研究得最多的一类，已鉴定出的抑菌性物质主要是有机酸类，如乳酸、甲酸、乙酸、丙酸和丁酸。这些酸性物质可以降低肠道的pH值，有效地抑制多种病原菌的生长和繁殖，对周围的益生菌却没有影响，协助肠道内建立以益生菌为主导地位的微生态环境；

2、维持肠道屏障的完整性：研究表明，某些益生菌的代谢产物能有效抑制有害物质引起的肠上皮细胞间紧密连接破坏、肠道通透性增加和肠上皮细胞凋亡；

3、调节炎症反应：益生菌代谢产物有抑制肠道过度炎症反应的作用。

鼠李糖乳杆菌GG株(LGG)是1983年由美国北卡罗来纳州立大学Sherwood Gorbac教授和Barry Goldin教授设定严格的筛选条件，从健康人体肠道中分离得到的一株益生菌菌株，不管是菌体本身还是其代谢产物，LGG都是目前研究得最为深入的益生菌菌株之一，其分泌的多肽或蛋白组分被认为是其发挥益生作用的主要活性成分，这些组分直接作用于肠上皮细胞和肠道免疫细胞，在维持肠道屏障完整性、抑制肠上皮细胞凋亡、调节炎症反应等方面发挥益生作用，并具有抑菌作用。

乳中存在多种生物活性肽类，如吗啡肽、降血压肽、矿物元素促进肽类等，但这些生物活性肽(bioactive peptides)在乳蛋白(称之为前体)中以非活性状态存在，只有在酶促作用下水解而释放出来，通过受体或游离化合物发挥生理作用。

Rokka等对LGG发酵乳经进一步胃蛋白酶和胰蛋白酶水解，研究表明：这种作用物中存在着类吗啡肽、免疫调节肽、ACE抑制肽和降血压肽(见表1)。

表1 LGG发酵乳经进一步酶水解后所释放的活性肽

这表明LGG酸奶制品的生理作用部分归因于LGG菌的这种酶促作用，这些生理作用包括LGG菌对rotavirus痢疾的辅助治疗/lgA生成刺激等。

这些肽是通过LGG发酵牛乳后，再进一步在体外用胰蛋白酶和胃蛋白酶保温水解8个小时后获得。

通过益生菌LGG对牛奶等发酵直接获得这些具有生理作用的功能肽迄今为止还未见到报道。

发明内容

本发明提供了一种含免疫调节肽等功能成分的LGG发酵产物的制备方法及其应用，包括：