[发明专利]一种预处理活化的间充质干细胞的制备方法及其在髓系白血病治疗中的应用

权利要求书

1.一种活化的间充质干细胞的制备方法，该制备方法的步骤为：

1)MSCs细胞传代至60mm*15mm皿中，使用含有10％FBS的α-MEM完全培养基，37℃、5％CO₂培养箱内培养过夜，使其密度达到80％。

2)将1，25D3加入完全培养基中，使其在培养液中的终浓度为1-10μM。在此条件下，培养并活化MSCs 24小时。

3)在使用1，25D3处理一天后，弃上清，PBS洗两遍，更换新鲜的含有10％FBS的α-MEM完全培养基继续培养MSCs以供后续使用(在此定义此种MSCs为Active MSCs)。

2.如权利要求1所述，一种活化的间充质干细胞，其特征在于使用异体来源的间充质干细胞，如：新生儿的脐带组织来源的间充质干细胞(UC-MSCs)。

3.如权利要求1和2所述，一种活化的脐带来源间充质干细胞的制备方法，其特征在于使化学小分子(如：1，25D3)激动间充质干细胞的维生素D受体(VDR)，使其高表达白介素6(IL-6)及吲哚-2，3双加氧酶(IDO)，进而发挥诱导急性单核白血病细胞分化的功能。

4.根据权利要求3中所述一种活化的间充质干细胞的制备方法，其特征在于，所述1，25D3对脐带间充质干细胞的刺激时间为24-48h。

5.根据权利要求4中所述一种1，25D3活化的间充质干细胞，其特征在于，所述1，25D3对脐带间充质干细胞的活化方法为：终浓度1-10μM 1，25D3刺激间充质干细胞。

6.根据权利要求5所述一种活化的间充质干细胞，其特征在于，化学小分子(VDR激动剂1，25D3及其改构物，如去泊三醇)激活间充质干细胞中的VDR，使MSC表达IL-6及IDO的表达量需提高3倍以上。相应地，白血病细胞(包括细胞系和原代细胞)的分化程度应上调至少50％(分化程度以CD11b、CD14双阳性表达为判定依据)。

7.权利要求5所述一种预处理活化的间充质干细胞，作为一种全新的髓系白血病(急性髓系白血病和慢性髓系白血病)分化疗法的应用。

8.根据权利要求6所述一种间充质干细胞，在治疗AML时进行外周静脉输注的有效剂量为5×10⁶/kg-10×10⁶/kg。