[发明专利]全人源抗人GPC3单克隆抗体及其用途

说明书

本发明提供一种全人源抗人GPC3单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链包括一个或多个选自下组的重链序列：SEQ ID NO:1、11、21、31、41；所述轻链包括一个或多个选自下组的轻链序列：SEQ ID NO:6、16、26、36、46。本发明全人源抗人GPC3单克隆抗体是利用全人源抗体小鼠平台一次性获得的全人源治疗性抗体(IgG)，省略了人源化过程中的技术步骤、避免了抗体药效的减弱，降低了临床使用中的副作用、减少了时间和经济投入。

技术领域

本发明属于抗体药物领域，具体涉及全人源抗人GPC3单克隆抗体及其用途。

背景技术

磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)是一个由580个氨基酸组成(65kD大小)的膜性硫酸乙酰肝素糖蛋白。主要在胎儿的肝脏和肾脏组织中表达，在健康成年人组织中几乎没有表达。但在成年人的癌细胞中有表达，且在不同的恶性肿瘤中表达差异很大，可能是肿瘤发生的重要原因之一。GPC3在肝癌中高表达，在黑素瘤、卵巢透明细胞癌、卵黄囊瘤、成神经细胞瘤、肝母细胞瘤和Wilm肉瘤细胞等肿瘤中少量表达，而在乳腺癌、间皮瘤、卵巢上皮癌和肺癌中则表现为表达沉默。

GPC3是由蛋白质、脂质和糖三者共价连接的复杂糖复合物，通过糖基磷脂肌醇锚定于细胞膜表面。GPC3基因定位于人染色体Xq26，基因组结构全长大约900kb,具有中央球状结构空间、C’端糖胺聚糖侧链连接位点等结构特点。其HS基与生长因子及其受体、细胞外基质蛋白和粘附分子等相互作用，参与调节细胞增殖、分化、粘附和迁移等。研究发现GPC3参与Wnt与C-myc等信号通路，诱导肿瘤的发生和发展。它主要通过Wnts信号途径发挥作用，通过自分泌和旁分泌的方式来激活经典Wnt信号途径使Wnt基因高表达，而Wnt基因的表达产物能够促进多种肿瘤组织生长。GPC3表达特点是在肝癌组织中过表达，而在正常肝组织不表达或低表达，基于GPC3特有的结构和功能特点，将其作为肝癌的治疗靶点，有可能成为治疗肝癌的一把利剑。

目前已有GPC3多肽疫苗和GPC3抗体治疗已经进入临床I或II期。如果将GPC3单克隆抗体与双(多)特异性抗体，CAR-T，抗体欧联等结合起来，GPC3抗体的应用前景是无量的。因而GPC3蛋白是一个具有巨大潜力的免疫治疗靶点。(Yasuhiro Shimizu，ToshihiroSuzuki1,Toshiaki Yoshikawa,Itaru Endo and Tetsuya Nakatsura；FrontierOncology,10April 2019)。

随着抗体被用来开发成药物，它的一些特征也被严格考量，如免疫原性、亲和力、稳定性、效应功能、半衰期、组织渗透性及其分布等。在抗体药物发展初期，鼠源单克隆抗体为人类疾病的研究起到了重大的推动作用，但这些鼠蛋白的免疫反应削弱了它的效能。随着抗体人源化技术的发展，多种人源化抗体成为可能。然而人源化过程繁复且费用昂贵，从而出现全人mAb取代人源化mAb的趋势。与噬菌体显示技术相比，转基因小鼠是生产全人mAb的主要方法。

人源化抗体(humanized antibody)又称互补决定区移植抗体，是指抗体的可变区部分(即Vh和VI区)或抗体所有全部由人类抗体基因所编码。而全人源抗体是指将人体抗体基因通过转基因或转染色体技术，将人类编码抗体的基因全部转移至基因工程改造的抗体基因缺失动物中，使动物表达人类抗体，达到抗体全人源化的目的。

在全球单抗市场中，全人源单抗是其未来的发展方向，已在欧美上市的32个单抗中，有9个是全人源单抗，随着转基因小鼠和噬菌体展示技术的成功应用，全人源化克隆单抗的比重将逐步增大。

日本中外制药(Chugai Pharmaceutical)和罗氏(Roche)合作研发的抗人GPC3的治疗性抗体hGC33(Codrituzumab)是一个人源化的治疗性抗体(来源于鼠源抗体GC33、CDR嫁接，其中轻链的CDR-L1中-Asn-Gly-氨基酸有脱酰胺作用，Asn与抗原结合有关，因而把Gly改为Arg)，是目前处于前列的肝癌治疗性抗体(临床II期)(专利：US 2015/02594.17A1，CN102702353A)。