[发明专利]一种流感病毒基因组末端检测方法及其应用

权利要求书

1.一种流感病毒基因组末端检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)提取流感病毒基因组，经反转录、环化反应得到环化的cDNA；

2)对步骤1)所得环化cDNA进行巢式反向PCR扩增，得到含有各个病毒基因片段3’和5’末端序列的PCR产物；

3)将步骤2)所得PCR产物克隆进入载体后，挑取至少2个克隆进行测序并分析测序结果，通过流感病毒基因组各基因片段高度保守的3’末端非编码区序列和5’末端非编码区序列的定位，即可获得准确的5’和3’末端非编码区及其临近编码区内的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流感病毒为B型流感病毒。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述反转录采用的引物的碱基序列为AGCAGAAGC。

4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述巢式反向PCR扩增采用的引物包括针对B型流感病毒的每个基因设计的2对反向PCR简并引物。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述反向PCR简并引物的设计要求为：在B型流感病毒中相对保守，并保证最终扩增产物大于300bp，从而保证每个靶基因片段的包装信号区域得到充分扩增。

6.根据权利要求4或5所述的检测方法，其特征在于，所述反向PCR简并引物的碱基序列如SEQ ID NO.1～32所示。

7.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述3’末端非编码区序列为AGCAGAAGC，所述5’末端非编码区序列为TGTTATCTACT。

8.用于检测B型流感病毒基因组末端的引物组，其碱基序列如SEQ ID NO.1～32所示。

9.用于检测B型流感病毒基因组末端的试剂盒，其包括权利要求8的引物组，进一步地，还包括碱基序列为AGCAGAAGC的反转录引物和环化酶。

10.权利要求1～7任一项的检测方法、权利要求8的引物组或权利要求9的试剂盒在B型流感病毒反向遗传操作系统构建中的应用。