[发明专利]一种重组(R)-ω-转氨酶及其突变体和应用

权利要求书

1.重组(R)-ω-转氨酶，其特征在于，该重组(R)-ω-转氨酶的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。

2.重组(R)-ω-转氨酶突变体，其特征在于，该突变体为下列之一：

(1)由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第72位的天冬氨酸突变为苯丙氨酸、酪氨酸、丙氨酸或甘氨酸；

(2)由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第72位的天冬氨酸突变为甘氨酸，且第248位丙氨酸突变为赖氨酸、苏氨酸、丝氨酸、组氨酸或酪氨酸；

(3)由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第72位的天冬氨酸突变为甘氨酸，且第248位丙氨酸突变为丝氨酸。

3.如权利要求2所述的重组(R)-ω-转氨酶突变体，其特征在于，该突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

4.一种如权利要求1所述的重组(R)-ω-转氨酶或如权利要求2所述的重组(R)-ω-转氨酶突变体的编码基因。

5.一种包含权利要求4所述编码基因的重组载体。

6.一种包含权利要求4所述编码基因的基因工程菌。

7.如权利要求1所述重组(R)-ω-转氨酶或权利要求2所述的重组(R)-ω-转氨酶突变体在生物催化前体酮类似物1-(吡咯烷-1-基)-4-(2,4,5-三氟苯基)-1,3-丁二酮合成西他列汀中间体(R)-3-氨基-1-(吡咯烷-1-基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁-1-酮中的应用。

8.如权利要求6所述基因工程菌在生物催化前体酮类似物1-(吡咯烷-1-基)-4-(2,4,5-三氟苯基)-1,3-丁二酮合成西他列汀中间体(R)-3-氨基-1-(吡咯烷-1-基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁-1-酮中的应用。

9.一种催化前体酮类似物1-(吡咯烷-1-基)-4-(2,4,5-三氟苯基)-1,3-丁二酮合成西他列汀中间体(R)-3-氨基-1-(吡咯烷-1-基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁-1-酮的方法，其特征在于，包括：以前体酮类似物1-(吡咯烷-1-基)-4-(2,4,5-三氟苯基)-1,3-丁二酮为底物，权利要求1所述的重组(R)-ω-转氨酶、权利要求2所述的重组(R)-ω-转氨酶突变体或权利要求6所述的基因工程菌为生物催化剂，异丙胺为氨基供体，磷酸吡哆醛为辅酶，在缓冲溶液中进行生物催化合成反应，得到西他列汀中间体(R)-3-氨基-1-(吡咯烷-1-基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁-1-酮。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述生物催化合成反应为35～50℃；所述缓冲溶液为三乙醇胺-HCl缓冲液，pH为8～9；所述底物的浓度为800～1200mM。