[发明专利]一种量子点微球标记抗体的制备方法

说明书

本发明提供一种量子点微球标记抗体的制备方法，包括如下步骤：(1)十八烷基胺修饰的聚苯乙烯‑co‑马来酸酐微球的制备；(2)量子点微球的制备：取十八烷基胺修饰的聚苯乙烯‑co‑马来酸酐微球，加入油溶性量子点和二氯甲烷，超声分散，离心去上清，水洗，得量子点微球；(3)活化：取量子点微球，洗涤，离心去上清，加入PBS缓冲液后，加入EDC和NHS，搅拌；(4)偶联：加入PBS缓冲液及抗体偶联；(5)清洗：离心去上清，用PBS缓冲液清洗后，得量子点微球标记的抗体。本发明属于生物技术领域，本发明制得的标记有抗体的量子点微球粒径均一性好，抗体标记后的活性高。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种量子点微球标记抗体的制备方法。

背景技术

量子点又称为半导体荧光纳米晶，主要是由II-VI族元素(如CdS、CdSe、CdTe、ZnSe等)和III-V族元素(如InP、InAs等)组成的纳米颗粒，粒径一般小于20纳米。量子点由于电子-空穴被量子限域，连续的能带结构变成具有分子特性的分立能级结构，受激后可以发射不同波长的荧光，并具有独特优异的发光特性，因而成为新一代荧光材料。但是由于壳核材料之间带宽差异较小，量子点稳定性不强，且配体容易被氧化，使量子点的荧光强度减弱或猝灭。因此，将量子点包裹于聚合物微球中，可进一步提高量子点的稳定性。量子点微球是通过将大量的量子点包裹于聚合物材料中，表现出更高的荧光强度,并且提高了量子点的光学稳定性。

目前，量子点微球作为一种新的荧光标记物，被广泛用于标记生物细胞、抗体等，从而进一步用于生物抗原或抗体的检测。中国专利申请CN 110618264A公开了一种基于量子点聚苯乙烯微球检测抗AQP4抗体的方法，其中的量子点微球使用聚苯乙烯材料制备得到，存在微球粒径的均一性差及标记后抗体的活性低等不足。

发明内容

为解决现有技术中存在的问题(粒径均一性差、抗体标记后活性低)，本发明提供了一种量子点微球标记抗体的制备方法，采用溶胀法将油溶性量子点包裹于十八烷基胺修饰的聚苯乙烯-co-马来酸酐微球中，并采用EDC和NHS偶联技术将免疫抗体标记于量子点微球上，改善了量子点微球的粒径均一性和抗体标记后活性。

本发明的目的将通过下面的详细描述来进一步说明。

本发明提供一种量子点微球标记抗体的制备方法，包括以下步骤：

(1)十八烷基胺修饰的聚苯乙烯-co-马来酸酐微球的制备：取聚苯乙烯-co-马来酸酐(PSMA)加入到二甲基亚砜(DMSO)中，并加入十八烷基胺(ODA)，于60℃-80℃下搅拌至原料溶解，恢复至室温后，加入N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，搅拌16-24h，反应完成后，离心去上清，水洗后，超声分散溶于水中，得十八烷基胺修饰的聚苯乙烯-co-马来酸酐微球；

(2)量子点微球的制备：取步骤(1)所得的十八烷基胺修饰的聚苯乙烯-co-马来酸酐微球，加入水中第一次超声分散后，再加入油溶性量子点和二氯甲烷，搅拌，第二次超声分散，敞开反应瓶使二氯甲烷挥发，搅拌过夜，离心去上清，水洗后分散于pH7.0-7.5的硼酸缓冲液中，得量子点微球，2-8℃保存；

(3)活化：取步骤(2)所得的量子点微球，用pH7.0-7.5的PBS缓冲液洗涤，离心去上清，加入pH7.0-7.5的PBS缓冲液后，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，室温搅拌30-60min，得活化量子点微球溶液；

(4)偶联：向步骤(3)所得的活化量子点微球溶液中加入pH7.0-7.5的PBS缓冲液及抗体，搅拌1-5h，发生偶联；

(5)清洗：偶联完成后，离心去上清，用PBS缓冲液清洗后，得量子点微球标记的抗体。

量子点微球标记的抗体可保存于含吐温-20的PBS缓冲液中，吐温-20的含量为0.05％-0.1％，优选地，吐温-20的含量为0.05％。