[发明专利]一种量子点微球标记抗体的制备方法

权利要求书

1.一种量子点微球标记抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）十八烷基胺修饰的聚苯乙烯-co-马来酸酐微球的制备：取聚苯乙烯-co-马来酸酐加入到二甲基亚砜中，并加入十八烷基胺，于60-80℃下搅拌至原料溶解，恢复至室温后，加入N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，搅拌16-24h，反应完成后，离心去上清，水洗后，超声分散溶于水中，得十八烷基胺修饰的聚苯乙烯-co-马来酸酐微球；

（2）量子点微球的制备：取步骤（1）所得的十八烷基胺修饰的聚苯乙烯-co-马来酸酐微球，加入水中第一次超声分散后，再加入油溶性量子点和二氯甲烷，搅拌，第二次超声分散，敞开反应瓶使二氯甲烷挥发，搅拌过夜，离心去上清，水洗后分散于pH7.0-7.5的硼酸缓冲液中，得量子点微球，2-8℃保存；

（3）活化：取步骤(2)所得的量子点微球，用pH7.0-7.5的PBS缓冲液洗涤，离心去上清，加入pH7.0-7.5的PBS缓冲液后，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，室温搅拌30-60min，得活化量子点微球溶液；

（4）偶联：向步骤（3）所得的活化量子点微球溶液中加入pH7.0-7.5的PBS缓冲液及抗体，搅拌1-5h，发生偶联；

（5）清洗：偶联完成后，离心去上清，用PBS缓冲液清洗后，得量子点微球标记的抗体；

所述步骤（2）中，二氯甲烷和水的体积比为1.5-5:47.5；第一次超声分散的条件：150W、超声5-10min；第二次超声分散的条件：150W、超声5-10min。

2.根据权利要求1所述量子点微球标记抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，聚苯乙烯-co-马来酸酐、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:6:6。

3.根据权利要求1所述量子点微球标记抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中，油溶性量子点为核壳型量子点。

4.根据权利要求3所述量子点微球标记抗体的制备方法，其特征在于，所述核壳型量子点为CdSe/ZnS核壳型量子点或CdSSe/ZnS核壳型量子点。

5.根据权利要求1所述量子点微球标记抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，量子点微球、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为200:9:12。

6.根据权利要求1所述量子点微球标记抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，离心的条件为：8000-10000r/min、离心5-8min；所述步骤（2）中，离心的条件为：8000-10000r/min、离心5-8min；所述步骤（3）中，离心的条件为：8000-10000r/min、离心5-10min；所述步骤（5）中，离心的条件为：8000-10000r/min、离心5-10min。

7.根据权利要求1所述量子点微球标记抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中，加入的抗体和量子点微球的质量比为3:100。

8.根据权利要求1所述量子点微球标记抗体的制备方法，其特征在于，所述抗体选自降钙素原抗体或羊抗兔IgG抗体。

9.一种量子点微球标记抗体，其特征在于，采用权利要求1至8中任一项所述量子点微球标记抗体的制备方法制得。