[发明专利]VB12靶向型西地那非纳米药物的合成方法及应用

说明书

本发明公开了VB12靶向型西地那非纳米药物的合成方法及应用，合成方法包括将丝胶蛋白与VB12混合于无水溶剂A中，加入CDI和DMAP催化，反应制备VB12靶向型丝胶蛋白；将得到的VB12靶向型丝胶蛋白与α‑氨基酸‑N‑羧基环内酸酐混合溶解在的无水溶剂B中，充分反应；加入西地那非，充分反应后将混合溶液装入透析袋中，得到所述VB12靶向型西地那非纳米药物。本发明所需原料廉价，操作方便，工艺简单，高效实用，可以在温和的条件下将VB12偶联到纳米药物载体上。得到的VB12靶向型西地那非纳米药物，性质稳定，具有高度生物组织相容性，可在水溶液中分散良好，同时具有肿瘤靶向性，可被肿瘤细胞快速摄取，具有更高效、安全的免疫治疗增敏效果。

技术领域

本发明涉及一种新型的西地那非靶向制剂，特别涉及一种VB12靶向型西地那非纳米药物的合成方法。

背景技术

肿瘤的免疫治疗因能激活人体自身免疫系统，长期有效清除体内肿瘤细胞受到业界关注。其中，PD-1免疫检查点阻断疗法已在临床部分肿瘤中得以应用，其原理为通过利用PD-1抗体(A-PD-1)结合肿瘤细胞表面的PD-L1配体，重新激活T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。但临床上，针对实体肿瘤，尤其是胃癌的A-PD-1免疫治疗效果并不理想。特异性阻断PD-1/PD-L1在不同类型实体瘤的治疗中应答率为20-40％，在胃癌中更只有11.5％-15％。这可能与实体肿瘤本身形成的炎症微环境的形成，招募、异常扩增并活化的骨髓来源的抑制性细胞(MDSCs)相关。由于实体肿瘤细胞及肿瘤基质细胞可以通过分泌炎症因子(IFN-y、IL-1b、IL-6、IL-8等)到肿瘤微环境中，形成肿瘤炎性微环境。肿瘤炎性微环境一方面能够通过上调MDSCs增殖相关的靶基因如c-myc及迁移相关分子S100A8和S100A9蛋白的表达，促进MDSCs的异常扩增及招募。另一方面，炎症因子可通过激活MDSCs的JAK-STAT1及JAK-STAT6通路，上调精氨酸酶1(AG1)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达，催化L-精氨酸分别产生尿素和一氧化氮，耗竭了T细胞增殖与活化的必需物质L-精氨酸，抑制T细胞的增殖与活化，从而起到抑制T细胞抗肿瘤反应。因此，抑制调控MSSCs相关炎症因子的分泌，是恢复T细胞抗肿瘤反应、增强免疫治疗效果的有效途径。

西地那非是5型磷酸二酯酶(PDE-5)抑制剂，既往用于治疗男性勃起功能障碍与肺动脉高压。部分临床研究发现：相对于无口服西地那非的群体，口服西地那非的人群可能对A-PD-1的敏感性更高。部分研究亦提示：西地那非可以激活肿瘤细胞内的c-GMP/PKG通路，而通路被认为与肿瘤细胞炎症因子的分泌具有高度相关性；通过激活c-GMP/PKG通路有望改善肿瘤炎症微环境，从而抑制MDSCs的异常扩增、募集和活化，最终恢复肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)的增殖活性。该现象提示：西地那非可能具有一定的增敏免疫治疗效果。但传统的西地那非剂型缺乏肿瘤靶向性，如若通过大治疗剂量给药达到提高免疫治疗疗效的目的，则有可能因人体全身不良反应的发生，如心肌梗死、血管闭塞、视网膜出血等，最终导致患者依从性降低。因此，靶向增强肿瘤细胞对西地那非的摄取，减少治疗剂量下西地那非的毒副作用，是利用西地那非免疫增敏作用的有效途径。

纳米材料载体(Nanometer Materials)如丝胶蛋白纳米胶束，具有低免疫原性、可生物降解性能和高生物相容性等优点，在生物医学领域中应用广泛。但目前该类纳米药物在血液循环中，主要通过肿瘤的透过性增强及滞留效应(permeability and retention，EPR)被动到达肿瘤病灶，缺乏主动靶向性。为增加靶向性，可利用肿瘤组织高度表达某些受体特性，在纳米药物表面进行标记。

钴胺素(Cobalamin)，也称为维生素B12，作为一种人体必需的水溶性维生素，参与人体细胞代谢的甲基化、脱氧核酸(DNA)的合成、细胞内核酸与蛋白质的合成。有研究显示，在快速增殖的肿瘤细胞表面，钴胺素受体数目显著上调，表现出肿瘤细胞对钴胺素摄取的增加。将维生素B12偶联在纳米材料载体上，有望提高纳米载体的靶向性。然而VB12的稳定性差，对光、热都很敏感，如何在温和的反应条件下将VB12偶联到纳米载体上是一项具有挑战性的工作。

发明内容