[发明专利]一种免疫抑制或抗炎功能增强型PD-L1阳性间充质干细胞、诱导试剂盒及应用

说明书

本发明公开一种免疫抑制或抗炎功能增强型PD‑L1阳性间充质干细胞、诱导试剂盒及应用，通过如下步骤制备：分离并培养间充质干细胞；采用免疫因子诱导复合剂诱导培养的间充质干细胞，获得免疫抑制或抗炎功能增强型PD‑L1阳性间充质干细胞，所述诱导复合剂包括5‑20ng/ml IFN‑γ和0‑20ng/ml TNF‑α。本发明提供的间充质干细胞能够高效表达PD‑L1受体，同野生型间充质干细胞相比，对胶原诱导的关节炎小鼠和CLP脓毒症模型小鼠均具有更好的治疗疗效，且未见副作用的发生。本发明提供的安全、有效的免疫抑制或抗炎功能增强型间充质干细胞，在自身免疫性疾病和炎性相关疾病的临床治疗中极具应用潜力。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种免疫抑制或抗炎功能增强型PD-L1阳性间充质干细胞，以及其体外诱导试剂盒、质量评估方法及应用。

背景技术

随着对干细胞研究的深入，间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells，MSCs)已被认为是用于组织损伤相关疾病修复治疗的理想工具。MSCs是一种具有自我更新和多向分化潜能的前体细胞，广泛分布于成人骨髓、脂肪、牙髓、胎盘和脐带等组织中。De Miguel等人在其研究(Immunosuppressive properties of mesenchymal stem cells:advances andapplications.)中发现MSCs不仅具有较强的自我更新能力以及向中胚层、外胚层和内胚层的多向分化潜能，而且具有良好的免疫调节能力和较强的抗炎特性，能够通过影响免疫细胞的活性和增殖、分化、分泌功能，从而有效抑制机体炎症级联反应，并且可有效阻止受损组织原位细胞的凋亡，促进血管生成以及激活组织原位干细胞等多种生物学特性，参与受损组织的再生与修复。因此，MSCs移植不仅能平衡校正患者失衡的免疫反应，同时又有组织再生和修复功能，这些特点使MSCs移植有望成为损伤、炎性和免疫相关疾病治疗的一种理想策略。

MSCs通过抑制炎症进而促进受损组织再生修复的途径已被证实，为基于MSCs的细胞移植治疗炎症和免疫相关疾病奠定理论基础。MSCs与炎症/免疫的相互作用在调节免疫应答的各种病理过程中的机制正在被越来越多的研究。尽管缺乏已知内源性MSCs在体内的确切功能，但MSCs在体外的性质和潜在的临床应用价值已被证实，但若想获得更好的临床疗效，需根据MSCs的体内外作用机制，通过相关干预手段针对特定的疾病获特定功能增强的MSCs。目前，大多数研究集中在体外扩增的MSCs群体的分化潜能和免疫调节能力上，但一般认为基于MSCs的细胞治疗发挥疗效不仅是因为MSC提供了重建组织的细胞来源，同时还能调节机体炎症微环境，并“增强/激活”其他原位组织细胞的组织修复能力。虽然细胞替换是MSCs治疗某些疾病的重要组成部分，但已发表的研究表明MSCs的治疗作用主要是通过发挥其免疫调节或者抗炎功能所导致的结果，而且这一功能是由炎症微环境刺激MSCs后发生功能性转换后，才能具有调控平衡机体炎症反应能力，并发挥临床治疗疗效。简而言之，天然条件下MSCs不具备抗炎和免疫调节能力，仅在炎症介质的作用下，发生功能性转变的MSCs能够产生大量的免疫调节蛋白、细胞动员因子、抗炎因子和生长因子，从而通过活化组织驻留的干细胞促进组织修复。

另外，尽管MSCs即可影响先天性免疫，也能够影响获得性免疫。然而，MSCs的免疫调节能力并不是组成性的，即天然状态下MSCs的免疫调节能力或者抗炎功能较弱，其免疫调节或者抗炎功能的获得需要由炎症细胞因子(如炎症微环境中的细胞因子)诱导来“赋能”的。然而，在炎症性疾病的发生和发展过程中，炎性细胞因子的数量和种类在疾病的不同发展阶段存在巨大差异，这些变化严重影响了MSCs向具有免疫调节或者抗炎功能方向活化的效能，因此患者机体免疫微环境状态成为最终决定MSCs免疫调节或者抗炎功能及其临床疗效发挥的重要决定因素，这也是部分MSCs移植治疗同种疾病患者间仍存在巨大临床疗效差异的重要原因。因此，若能在体外直接将MSCs诱导成免疫调节功能或者抗炎功能增强型MSCs，将显著提高MSCs的临床疗效，获得高成药性的MSCs细胞制剂产品。