[发明专利]一种从大麻籽或大麻籽果壳中制备大麻酰胺有效部位的方法

说明书

本发明提供一种从大麻籽或大麻籽果壳中制备大麻酰胺有效部位的方法，其具有工艺简单、易于放大和产品得率较高等特点。所述方法包括如下步骤：1)将干燥的大麻籽或大麻籽果壳粉碎成粗粉；2)将粗粉用乙醇水溶液进行提取，将所得提取液进行固液分离，并将所得上清液浓缩成浓缩液；3)将浓缩液静置沉淀，将所得沉淀用乙醇水溶液转溶，得到转溶液；4)将步骤3)得到转溶液用半制备色谱分离，所述半制备色谱条件的分离包括：制备柱为C18色谱柱，以磷酸水溶液和甲醇为流动相，检测波长为255～257nm，收集对应于大麻酰胺A的色谱图特征峰的流出液；5)流出液合并后经浓缩、干燥得到所述大麻酰胺有效部位成品。

技术领域

本发明涉及一种从大麻籽或果壳中制备大麻酰胺有效部位的方法，属于生化分离技术领域。

背景技术

大麻籽(又称为火麻籽)在中国及其他一些地区有着悠久的食用历史，补中益气，久服康健不老。据报道，大麻籽中的木脂素酰胺类化合物具有较强的清除自由基、抗氧化、抗衰老、抗阿尔兹海默症、保肝护肝、神经保护等活性，在新型药物和功能保健食品领域有很大的应用潜力。已报道的大麻籽木脂素酰胺类化合物包括12种大麻酰胺化合物(大麻酰胺(Canabisin)A、B、C、D、E、F、G、M、N、O、大麻酰胺E对映异构体、大麻酰胺N对应异构体(周悦芳，火麻籽化学成分定性定量及其抗AD活性研究，山东大学硕士论文，2018)。其中，大麻酰胺A为大麻籽大麻酰胺类物质中含量最高的代表性化合物；大麻酰胺B是一种与大麻酰胺A结构非常相似的化合物。大麻酰胺A和B的结构式依次分别如下：

有效部位是指具有一定功效作用、化学结构类型清楚、尚未提纯的混合物，多用作中药制剂的原料药及保健食品的原料。相对于高纯的单体成分的制备，有效部位的制备既简便易行、成本低廉、又能获得大量的具有某种或多种功效的原料药或保健食品原料。

目前关于大麻籽大麻酰胺类物质的制备方法，国内外尚无专利报道，但有几篇关于大麻酰胺单体制备的基础研究，如采用95％乙醇热回流提取、乙醇-石油醚萃取、大孔树脂分离、聚酰胺树脂分离、RP-MPLC柱层析分离及后续纯化等步骤，从10.7Kg原料得到21.91mg大麻酰胺A和52mg大麻酰胺B(周悦芳，火麻籽化学成分定性定量及其抗AD活性研究，山东大学硕士论文，2018)；闫晓丽采用75％乙醇冷浸提取、萃取、反相ODS柱层析分离、反相中压柱RP-HPLC分离、Sephadex LH-20柱层析分离、沉淀等步骤从5.0Kg原料制备出35.0mg大麻酰胺A(火麻仁化学成分及其生物活性研究，山东大学硕士论文，2016)；吴娜等人采用70％的乙醇提取、乙酸乙酯萃取、硅胶柱层析分离、Sephadex LH20纯化、反复甲醇重结晶等步骤获得大麻酰胺A粉末，其得率未知(吴娜，沈谦，蔡光明，赵艳玲，何群，王峰，巴马火麻仁木脂素酰胺类提取物的鉴定及清除自由基活性的研究，化学学报，67(7)：700-704，2009)。

目前，还有几篇文献报道了火麻仁木脂素酰胺类提取物的制备方法，基本采用相似的工艺路线：65％或70％乙醇提取、经D101等大孔树脂柱层析富集、减压干燥即得(吴娜，火麻仁木脂素酰胺类的提取纯化及其抗氧化与保肝活性研究，湖南中医药大学硕士论文，2009；刘军，蔡霈，蔡光明，王艳华，巴马火麻仁总木脂素酰胺类提取物对小鼠急性肝损伤的保护作用，中南药学，2014,12(3):228-230；蔡霈，付珣，蔡光明，火麻仁木脂素酰胺类提取物对D－半乳糖胺盐酸盐致小鼠肝损伤的保护作用，解放军药学学报，2017,33(1)：9-11，16)。

然而，目前的大麻酰胺单体或提取物的制备方法，存在或步骤繁琐、或有效成分含量偏低等不足，而且大多数制备方法都采用大孔树脂柱层析这种较为粗放的分离手段，经提取和大孔树脂分离后获得的木脂素酰胺提取物里大麻酰胺的含量偏低，可能会影响产品的活性。

发明内容

有鉴于此，本发明提供从大麻籽或大麻果壳中制备大麻酰胺有效部位的方法，其具有工艺简单、易于放大和产品得率较高等特点。

本发明为得到其目的，提供如下技术方案：