[发明专利]双特异性嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明属于免疫治疗技术领域，具体涉及一种可识别CD19和CD123肿瘤相关抗原的双特异性嵌合抗原受体，一种该嵌合抗原受体的表达载体、CAR‑T细胞及其应用。所述双特异性嵌合抗原受体可识别CD19和CD123双靶点，不仅可以有效的表达于T淋巴细胞，而且能够减少肿瘤免疫逃逸的几率，降低CAR‑T治疗后肿瘤复发率。

技术领域

本发明属于免疫治疗技术领域，具体涉及一种双特异性嵌合抗原受体，包含双特异性嵌合抗原受体的载体，一种表达双特异性嵌合抗原受体的CAR-T细胞及其应用。

背景技术

CAR-T（嵌合抗原受体T）细胞疗法在治疗血液系统恶性肿瘤中已取得了显著成果。但是由于肿瘤尤其是实体瘤的异质性，往往肿瘤细胞表面不止表达一个靶抗原，并且随着研究的进展研发人员还发现经CAR-T细胞治疗的少部分患者出现肿瘤细胞下调或突变其表面表达的CAR-T靶点抗原产生逃逸（Robbie G. Majzner et al. (2018) Tumor AntigenEscape from CAR T-cell Therapy），造成治疗效果较差以及复发等情况。因此设计针对多靶点的CAR结构十分有必要，简单的同时表达2个不同靶点的CAR涉及到不同的CAR结构感染能力不同，会产生多种CAR-T细胞亚群，不利于产品临床应用；如果仅是简单的两个不同靶点CAR结构串联于一个载体，这样CAR载体较大不易转导T细胞，不同的结构涉及到CAR载体病毒制备能力不同，CAR转导能力不同，对T细胞产生的刺激不同，疗效不同等多种因素。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于一种靶向CD19和CD123双靶点的双特异性嵌合抗原受体，所述双特异性嵌合抗体可以同时识别CD19和CD123双靶点，可以避免表达CD19肿瘤对CD19 CART的免疫逃逸，对经CD19 CART治疗后复发但CD19为阴性的患者也可以起到治疗作用。

随着CAR-T治疗临床数据的积累，研究者们发现在CAR-T治疗后复发的患者体内CAR-T针对的靶抗原被下调甚至“丢失”，本发明设计可同时识别两个肿瘤相关靶点的双特异性嵌合抗原受体来避免肿瘤表面其中之一抗原丢失，而导致的CAR-T细胞就失去“杀伤目标”。

为实现上述目的，本发明采用以下方案：

所述CAR结构为靶向CD19和CD123双抗原的双特异性嵌合抗原受体，并且双特异性嵌合抗原受体结构为靶向CD19的嵌合抗原受体与靶向CD123的嵌合抗原受体经T2A连接串联；靶向CD19ScFv的氨基酸序列为SEQ ID NO.8，靶向CD123ScFv的氨基酸序列为SEQ IDNO.9。

进一步，所述的靶向CD19ScFv的氨基酸序列为SEQ ID NO.9，靶向CD123ScFv的氨基酸序列为SEQ ID NO.10。

进一步，所述靶向CD19ScFv的核苷酸序列为SEQ ID NO.2，靶向CD123ScFv的核苷酸序列为SEQ ID NO.3。

进一步，靶向双特异性位点的双CAR结构的自剪切多肽选自T2A、P2A、E2A、F2A以及内部核糖体进入位点IRES。

优选的，所述的嵌合抗原受体连接胞外识别区与跨膜区域的hinge区核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；跨膜区域的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；胞内共刺激信号域为CD137，核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；胞内信号活化区域为CD3ζ，核苷酸序列如SEQ IDNO.7所示。

优选的，所述的嵌合抗原受体连接胞外识别区与跨膜区域的hinge区氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示；跨膜区域的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示；胞内共刺激信号域为CD137，氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示；胞内信号活化区域为CD3ζ，氨基酸序列如SEQ IDNO.13所示。

优选的，所述的嵌合抗原受体包含如SEQ ID NO.1的核苷酸序列。