[发明专利]一种二元猪基因鉴定方法

说明书

本发明涉及基因检测技术领域，尤其指一种二元猪基因鉴定方法，以待测猪的MC1R基因的第一等位基因和第二等位基因作为为模板，用第一正向引物、第二正向引物和通用反向引物进行PCR扩增，采用荧光检测仪器对扩增产物进行荧光检测，根据扩增产物的荧光类型对待测猪的MC1R基因进行SNP分型。本发明设计两个正向引物和一个通用反向引物，利用长白和大白猪的MC1R基因不存在G1554A突变和杜洛克MC1R基因存在G1554A突变的特点对二元猪(长白X大白杂交)进行基因鉴定，提高了检测结果的准确度；本发明采用荧光探针技术，分别在两个正向引物的一端连接特异荧光序列FAM和特异荧光序列HEX，通过检测对PCR扩增产物进行荧光检测，即可对二元猪进行基因鉴定，检测操作更加简单。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，尤其指一种二元猪基因鉴定方法。

背景技术

二元猪为两个品种之间的杂交，市场上常用的杂交方式是大白和长白猪杂交，随着市场上三元猪代替二元猪的情况日益严重，为了避免养殖户不必要的损失，二元猪的检测辨别具有重要意义。通过基因序列比对后发现：所有的长白、大白MC1R基因不存在G1554A突变，所有的杜洛克MC1R基因存在G1554A突变，由此可知，二元猪(长白X大白杂交)个体不存在G1554A突变，因此根据此变异位点设计二元猪的检测产品，能够帮助企业挽回损失，意义重大，现有的检测产品具有检测结果准确度不高，检测过程繁琐的缺点。

发明内容

针对上述现有技术存在的技术问题，本发明提供一种检测结果准确度高、检测操作简单的二元猪基因鉴定方法。

为了达成上述技术目的，本发明采用如下技术方案：

一种二元猪基因鉴定方法，以待测猪的MC1R基因的第一等位基因和第二等位基因作为为模板，用第一正向引物、第二正向引物和通用反向引物进行PCR扩增，采用荧光检测仪器对扩增产物进行荧光检测，根据扩增产物的荧光类型对待测猪的MC1R基因进行SNP分型。

进一步的，所述第一正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述第一正向引物序列包括特异荧光序列FAM，所述特异荧光序列FAM结合FAM荧光标记物，所述特异荧光序列FAM的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

进一步的，所述第二正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述第二正向引物序列包括特异荧光序列HEX，所述特异荧光序列HEX结合HEX荧光标记物，所述特异荧光序列HEX的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。

进一步的，所述通用反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

进一步的，所述第一正向引物与第一等位基因特异匹配，所述第一等位基因为二元猪的MC1R基因。

进一步的，所述第二正向引物与第二等位基因特异匹配，所述第二等位基因为非二元猪MC1R基因。

进一步的，所述荧光检测仪器为酶标仪。

进一步的，所述扩增产物的荧光类型包括FAM荧光和HEX荧光；若以所述第一正向引物和通用反向引物进行PCR扩增时，所述扩增产物的荧光类型为FAM荧光；若以所述第二正向引物和通用反向引物进行PCR扩增时，所述扩增产物的荧光类型为HEX荧光。

进一步的，当所述扩增产物只检测到FAM荧光时，所述待测猪的MC1R基因为二元猪MC1R基因纯合子，所述待测猪为纯二元猪；当所述扩增产物只检测到HEX荧光时，所述待测猪的MC1R基因为非二元猪MC1R基因纯合子，所述待测猪为非二元猪；当所述扩增产物同时检测到FAM荧光和HEX荧光时，所述待测猪的MC1R基因为二元猪MC1R基因杂合子，所述待测猪为非纯二元猪。

与现有技术相比，本发明的有益效果：