[发明专利]一种基于UPLC-QQQ-MS/MS法的知母质量检测方法

权利要求书

1.一种基于UPLC-QQQ-MS/MS法的知母质量检测方法，其特征在于：它包括如下步骤：

(1)标准曲线的建立

a、对照品溶液的制备：

取甾体皂苷类和黄酮类对照品，加甲醇溶液溶解，制成对照品溶液；

b、对照品溶液的测定：

配制系列浓度的对照品溶液，分别注入UPLC-QQQ-MS/MS联用仪检测，测定峰面积，得到甾体皂苷类和黄酮类的标准曲线方程；

色谱条件如下：

色谱柱：C18色谱柱；

流动相：流动相A为0.01％甲酸，流动相B为乙腈；

梯度洗脱条件：

0～3min，93％A；3～7.5min，93％→87％A；7.5～8min，87％→78％A；8～11min，78％→65％A；11～12.5min，65％→55％A；12.5～18min，55％→20％A；18～20min，20％→5％A；20～22min，5％A；22～22.5min，5％→93％A；22.5～25min，93％A；

质谱条件：

离子化模式：ESI；

检测方式：正、负离子交替扫描；

扫描模式：多反应监测；

(2)知母样品中甾体皂苷类和黄酮类成分含量测定：

c、供试品溶液的制备：

取知母，粉碎过筛，加甲醇溶液提取，过滤，续滤液用甲醇溶液稀释400～600倍，作为供试品溶液；

d、供试品溶液的测定：

取供试品溶液，注入UPLC-QQQ-MS/MS联用仪检测，以步骤b相同的色谱条件和质谱条件检测，根据步骤(1)的标准曲线得到知母样品中甾体皂苷类和黄酮类含量。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：步骤(2)所述知母与甲醇溶液的质量体积比为0.1～0.5g：50ml，优选0.2g：50ml。

3.根据权利要求1或3所述的检测方法，其特征在于：所述甲醇溶液为25-75％甲醇，优选50％甲醇。

4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：步骤(2)所述过筛是过三号筛；所述提取为超声提取，时间40min；所述续滤液稀释500倍。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述甾体皂苷类为知母皂苷E₁、知母皂苷BⅡ、知母皂苷BⅢ、知母皂苷I、知母皂苷AⅠ、知母皂苷AⅡ和/或知母皂苷AⅢ，其中，知母皂苷E₁对照品溶液系列浓度范围为1.63～407.13ng.mL^-1，知母皂苷BⅡ对照品溶液系列浓度范围为61.55～15387.96ng.mL^-1，知母皂苷BⅢ对照品溶液系列浓度范围为1.94～485.11ng.mL^-1，知母皂苷I对照品溶液系列浓度范围为1.98～495.34ng.mL^-1，知母皂苷AⅡ对照品溶液系列浓度范围为0.39～98.16ng.mL^-1，知母皂苷AⅢ对照品溶液系列浓度范围为2.29～357.58ng.mL^-1，知母皂苷AⅠ对照品溶液系列浓度范围为0.60～150.53ng.mL^-1。

6.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述黄酮类为新芒果苷、芒果苷和/或异芒果苷，其中，新芒果苷对照品溶液系列浓度范围为27.68～6918.87ng.mL^-1，芒果苷的对照品溶液系列浓度范围为10.25～2563.12ng.mL^-1，异芒果苷对照品溶液系列浓度范围为0.92～230.47ng.mL^-1。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(1)所述C18色谱柱为WatersACQUITY UPLC BEH C18色谱柱，规格为2.1×100mm×1.7μm；所述色谱条件中，进样量：2μL，流速为0.4mL/min，柱温30℃。