[发明专利]一种基于UPLC-QQQ-MS/MS法的知母质量检测方法

说明书

本发明公开了一种基于UPLC‑QQQ‑MS/MS法的知母质量检测方法，包括如下步骤：(1)标准曲线的建立；(2)知母样品中甾体皂苷类和黄酮类成分含量测定。本发明基于UPLC‑QQQ‑MS/MS的多指标综合评价知母药材质量的方法，简单、快速、准确度好、灵敏度高，适用于知母中甾体皂苷类和黄酮类成分的定性和定量分析，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于药材检测技术领域，涉及一种基于UPLC-QQQ-MS/MS法的知母质量检测方法。

背景技术

知母为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge.的干燥根茎，具有清热泻火、滋阴润燥等功效，临床用于外感热病、高热烦渴、肺热燥咳，内热消渴等症。现代研究表明，知母具有抑制血小板聚集、降血糖、抗抑郁和抗阿尔兹海默症等药理作用。知母中的化学成分有甾体皂苷、黄酮类、木脂素类、生物碱、多糖及有机酸等，其中主要的化学活性成分为甾体皂苷和黄酮类，两者也是知母中重要的药理活性物质群，对知母的质量评价和控制至关重要。

《中国药典》2015版采用高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)测定其甾体皂苷类成分知母皂苷BII的含量，采用高效液相色谱-紫外光检测法(HPLC-UV)测定其黄酮类成分芒果苷的含量，质量控制指标较单一，指标性成分的代表性不够，很难反映知母的整体质量。知母中含有的大部分甾体皂苷类成分无紫外吸收，紫外检测器不适用于含量测定，同时这些甾体皂苷类成分在蒸发光散射检测器上的响应也较低，因此，HPLC-UV或HPLC-ELSD都不是知母中皂苷类成分最佳的定量分析方法。超高效液相质谱-三重四级杆质谱联用法(UPLC-QQQ-MS/MS)具有分析时间短、分离度好、灵敏度高的优点，近年来被广泛用于中药多组分的分析。张慧等，HPLC-ESI-MS/MS鉴定知母中的甾体皂甙[A]；大连国际色谱学术报告会和展览会文集[C]；2007年，用液相质谱-三重四级杆质谱联用法仅能分析出其中的甾体皂苷成分，且总离子流图显示其分离效果差，无法用于知母活性成分的定量分析。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种知母质量检测方法。

本发明基于UPLC-QQQ-MS/MS法的知母质量检测方法，它包括如下步骤：

(1)标准曲线的建立

a、对照品溶液的制备：

取甾体皂苷类和黄酮类对照品，加甲醇溶液溶解，制成对照品溶液；

b、对照品溶液的测定：

配制系列浓度的对照品溶液，分别注入UPLC-QQQ-MS/MS联用仪检测，测定峰面积，得到甾体皂苷类和黄酮类的标准曲线方程；

色谱条件如下：

色谱柱：C18色谱柱；

流动相：流动相A为0.01％甲酸，流动相B为乙腈；

梯度洗脱条件：

0～3min，93％A；3～7.5min，93％→87％A；7.5～8min，87％→78％A；8～11min，78％→65％A；11～12.5min，65％→55％A；12.5～18min，55％→20％A；18～20min，20％→5％A；20～22min，5％A；22～22.5min，5％→93％A；22.5～25min，93％A；

质谱条件：

离子化模式：ESI；

检测方式：正、负离子交替扫描；

扫描模式：多反应监测；

(2)知母样品中甾体皂苷类和黄酮类成分含量测定：

c、供试品溶液的制备：