[发明专利]用于特异性吸附重金属铅的表面展示工程菌及构建方法和应用

权利要求书

1.一种用于特异性吸附重金属铅的表面展示工程菌的构建方法，其特征是包括如下步骤：

(1)通过PCR反应分别扩增编码锚定蛋白INPN和铅结合蛋白的核苷酸序列，所述铅结合蛋白选自耐金属贪铜菌CH34的三种非膜蛋白PbrR，PbrR691或PbrD；并在扩增时去除锚定蛋白INPN末端的终止密码子，引入柔性连接肽FL，所述柔性连接肽FL的氨基酸序列为GGGGS，在铅结合蛋白编码序列的终止密码子前引入六聚组氨酸标签His-Tag；所述铅结合蛋白PbrR、PbrR691、PbrD的核苷酸序列分别如SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4所示；所述INPN的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

(2)通过酶切连接的方式将锚定蛋白INPN与铅结合蛋白基因序列进行融合，构建融合蛋白模块，分别为PbrR融合模块INPN-FL-PbrR、PbrR691融合模块INPN-FL-PbrR691和PbrD融合模块INPN-FL-PbrD；

(3)将融合蛋白模块克隆至pET-28a(+)质粒载体上；并将克隆后的质粒载体导入宿主底盘细胞BL21(DE3)中，通过菌落PCR筛选带有目的筛选质粒的阳性克隆菌株，即为特异性铅结合蛋白表面展示工程化菌株。

2.如权利要求1所述方法构建的表面展示工程菌，其特征是包括PbrR的表面展示工程菌BL21(pR-FL)，所含重组质粒pR-FL核苷酸序列为SEQ ID No.6；包括PbrR691的表面展示工程菌BL21(pR691-FL)，所含重组质粒pR691-FL核苷酸序列为SEQ ID No.7；包括PbrD的表面展示工程菌BL21(pD-FL)，所含重组质粒pD-FL核苷酸序列为SEQ ID No.8。

3.如权利要求1所述的表面展示工程菌在铅离子污染环境原位修复中的应用。