[发明专利]一种利用石墨烯多重信号放大SPR传感测定双酚A的方法

说明书

本发明涉及一种利用石墨烯多重信号放大SPR传感测定双酚A的方法，其包括步骤：S1:试样准备：使用磁性石墨烯为吸附剂，对待测样品中的双酚A进行吸附富集，然后洗脱液洗脱，将洗脱下来的双酚A定容，得到待测试样；S2:将SPR芯片的贵金属片表面清洗干净并连接羧基化氧化石墨烯；S3:利用固定在SPR芯片贵金属表面的羧基化氧化石墨烯连接固定BPA‑BSA；S4:基于间接竞争法利用SPR免疫传感测定待测试样中双酚A的浓度：将含BPA的待测试样和BPA的单克隆抗体溶液混合进样，共同竞争被固定在SPR芯片表面的BPA‑BSA，SPR产生的信号与待测试样中BPA的浓度呈反比。按照本发明的测定方法，使LOD值低至5.169×10supgt;‑5/supgt;ng/mL，ICsubgt;50/subgt;为5.137×10supgt;‑3/supgt;ng/mL，检测范围2.288×10supgt;‑4/supgt;ng/mL～9.211×10supgt;‑2/supgt;ng/mL，可实现对双酚A超痕量的准确检测。

技术领域

本发明涉及一种内分泌干扰的检测技术领域，尤其是一种利用石墨烯多重信号放大SPR传感测定双酚A的方法。

背景技术

随着人们生活水平的提高，人们对环境激素也越来越重视，关注食源性激素与人类健康的研究也越来越多。食源性物质中雌激素的含量，对人们身体的健康有很大的影响。尤其是牛奶，牛奶的主要摄入人群是儿童。牛奶中有相当量的雌性激素，有些学者认为，目前消费的牛奶比100年前明显增加。双酚A，也称为BPA，是一种化学物质，普遍用于环氧树脂和聚碳酸酯塑料制品中，在生活中最常见的塑料制品就是婴儿的塑料奶瓶。由于人体普遍暴露于双酚A的环境中，体内循环的双酚A浓度为0.2ng/mL～20ng/mL。不少研究已经证明，暴露于双酚A环境中可以引起多种健康问题，如焦虑、短期失忆、肥胖、糖尿病和心血管疾病等。2003年，研究人员Hunt就已经提出双酚A是一种人造的，具有雌激素特征的化学物质，可以诱导增加中板集合障碍和减数分裂非整倍性的概率。到目前为止，双酚A是唯一已知的可以引起非整倍体(aneugen)的化学物质，该物质能通过破坏减数分裂过程从而使机体产生含有错误染色体数量的胚胎。

为了保证下一代的健康，需要对牛奶及其他饮食中双酚A的含量进行控制。Spr(Surface Plasmon Resonance)即表面等离子体共振，是一种用于表征表面折射系数改变的光学专业技术。SPR传感检测芯片包括金膜和金膜(或银膜等其他贵金属片)表面的微流通道，在微流通道内且在金膜表面固定着可与目标分子特异性结合的识别分子，金膜下方有棱镜。分析时，当试样从微流通道流过，试样中目标分子与识别分子相互结合，会引起金膜表面折射率变化，最终导致SPR角变化，通过检测SPR角度变化，获得被分析物的浓度、亲和力等信息。SPR传感测定内分泌干扰具有检测程序简单、无需标记、可实时快速动态检测的优点，且已成为最有希望用于生物痕量检测的技术之一。由于双酚A具有巨大的危害性且能在人体内积累，人们希望对双酚A实现超痕量的检测，而如何进一步降低检测限也是相关研究者的共同目标。

发明内容

(一)要解决的技术问题

为了解决现有技术的上述问题，本发明提供一种利用石墨烯多重信号放大SPR传感测定双酚A的方法，通过优化检测程序结合修饰SPR检测芯片，结合采用间接竞争法进一步降低试样中双酚A的检出限、提高检测的灵敏度，实现对试样中双酚A超痕量的检测。

(二)技术方案

为了达到上述目的，本发明采用的主要技术方案包括：

一种利用石墨烯多重信号放大SPR传感测定双酚A的方法，包括如下步骤：

S1:试样准备

使用磁性石墨烯为吸附剂，对待测样品中的双酚A进行吸附富集、并用洗脱液洗脱，将洗脱下来的双酚A定容，得到待测试样；

S2:对SPR芯片进行修饰：将SPR芯片的贵金属片表面清洗干净，并在贵金属片表面连接羧基化氧化石墨烯；