[发明专利]一种食品中非法添加环己基去甲他达拉非的鉴定方法

权利要求书

1.一种食品中非法添加环己基去甲他达拉非的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：制备UPLC-Q-Orbitrap HRMS超高效液相色谱-四级杆/静电轨道阱高分辨质谱仪的供试品溶液和HPLC高效液相色谱仪的供试品溶液；

S2：取供试品进行化合物分离纯化，得到纯化物；

S3：取S2所得纯化物，制备NMR核磁共振仪供试品；

S4：对供试品进行检测，包括使用LC-20AR制备液相色谱仪配PAD二极管阵列检测器，对得到的一级二级质谱图、特征吸收光谱图进行分析，通过核磁共振仪进行结构解析得到环己基去甲他达拉非结构式，最后鉴定出非法添加的环己基去甲他达拉非；

所述步骤S4中获得一级二级质谱图的UPLC-Q-Orbitrap HRMS仪器条件：

UPLC-Q-Orbitrap HRMS液相色谱质谱联用系统，色谱条件：色谱柱：Hypersil GOLDC18柱，2.1×100mm，1.9μm；柱温：35℃；流动相：A相为0.1％甲酸水、B相为乙腈；

所述色谱条件中，梯度洗脱方式为：0～1min时，A相体积百分比为95％；1～15min时，A相体积百分比的变化为95％→2％；15～17min时，A相体积百分比为2％；17.5～20min时，A相体积百分比为95％；流速：0.3mL/min，进样量：2μL；

所述UPLC-Q-Orbitrap HRMS液相色谱质谱联用系统，质谱条件：离子源：HESI-II；喷雾电压：3800V；气化温度：300℃；鞘气压：35arb；辅助气压：10arb；离子传输管温度：320℃；质量范围：m/z 80-1100；Full MS分辨率：70000；dd-MS²分辨率：17500；NCE：20,40,60；

所述步骤S4中获得特征吸收光谱图的HPLC仪器条件：Dionex UltiMate 3000液相色谱仪，DAD二极管阵列检测器：扫描范围：190～400nm；色谱柱：Hypersil GOLD C18柱，10×250mm，10μm；柱温：35℃；流动相：水为A相，甲醇为B相；梯度洗脱方式：0～60min时，A相体积百分比的变化为95％→5％；60～61min时，A相体积百分比的变化为5％→95％；61～70min时，A相体积百分比为95％；流速：0.3mL/min；进样量：2μL；

步骤S4中所述LC-20AR制备液相色谱仪，PAD二极管阵列检测器条件：扫描范围：190～400nm；色谱柱：Inertsil ODS-3半制备色谱柱，2.1×100mm，10μm；柱温：35℃；流动相：水为A相，甲醇为B相，体积比水:甲醇＝50:50；流速：10mL/min。

2.如权利要求1所述的食品中非法添加环己基去甲他达拉非的鉴定方法，其特征在于，所述步骤S1中，具体步骤为：取供试品10mg，加甲醇100mL，超声30min，过滤，作为UPLC-Q-Orbitrap HRMS和HPLC供试品溶液。

3.如权利要求1所述的食品中非法添加环己基去甲他达拉非的鉴定方法，其特征在于，所述步骤S2中，具体步骤为：取供试品2g，加甲醇10mL，超声30min，过滤，取滤液适量进样，收集主色谱峰成分，减压蒸发除去溶剂，即得纯化物10mg，纯化物纯度＞95％。

4.如权利要求1所述的食品中非法添加环己基去甲他达拉非的鉴定方法，其特征在于，所述步骤S3中，具体步骤为：NMR核磁共振仪供试品制备：取步骤S2所得的纯化物15mg，用0.5mL氘代氯仿溶解至核磁共振测试管中。

5.如权利要求1所述的食品中非法添加环己基去甲他达拉非的鉴定方法，其特征在于，步骤S4中所述核磁共振仪条件：25℃，供试品取样量：30mg，核磁氢谱：600MHz，碳谱：150MHz。