[发明专利]交联或高分子量透明质酸类物质的微生物限度检测方法

说明书

本发明公开了一种交联或高分子量透明质酸类物质的微生物限度检测方法，该方法在低温弱酸条件下对待检的交联或高分子量透明质酸类物质进行酶解处理，以降低交联或高分子量透明质酸类物质溶液的粘度，然后将粘度降低的酶解液配制检液，实现待检样品的微生物限度检测。本发明在低温弱酸下对待检样品进行处理，降低了检液的粘度，解决了交联或高分子量透明质酸类物质固体粉末溶解度低、检测过程中难以在平板培养基表面均匀涂布、无法获得微生物限度真实数据的难题，为交联或高分子量透明质酸类物质的微生物限度检测提供了方便有效的检测方法。

技术领域

本发明涉及一种交联或高分子量透明质酸类物质的微生物限度检测方法，属于透明质酸微生物检测技术领域。

背景技术

透明质酸是一种广泛存在于动物及人体内的天然粘多糖，是由N-乙酰氨基葡糖和D-葡萄糖醛酸双糖重复单位通过β-(1→4)糖苷键和β-(1→3)糖苷键构成的无分支高分子糖胺聚糖。由于其自身的黏弹性、润滑性等特有的物理特性，广泛应用于医药、化妆品、食品领域。

交联透明质酸是透明质酸通过化学交联修饰得到的高分子凝胶，交联后的透明质酸分子链更长，且具有更加复杂的三维结构，与天然透明质酸相比，在非常低的浓度下便可形成粘度很高的液体，溶解难度大且很难配成高浓度的水溶液，一般浓度都在1wt%以下。并且根据交联度的不同，交联透明质酸均具有一定的抗酶解活性。由于这两方面的特性，使得交联透明质酸具有广阔的应用前景，可以应用于美容填充，骨科填充，化妆品等领域。

高分子量透明质酸一般是指分子量在1000 KDa以上的透明质酸，该类透明质酸因为具有高粘性、高保湿性的优势，在化妆品等领域有广泛的应用。因为透明质酸的粘度随着分子量的增大而升高，因此高分子量的透明质酸与交联透明质酸一样在非常低的浓度下便可形成粘度很高的液体，难于溶解和混合，很难配成高浓度的溶液。

在2015版《化妆品安全技术规范》中规定，生产出售的化妆品必须满足安全性要求，其中包括对微生物限度的检测要求。所谓微生物限度，包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌等项目，都需要满足要求后才能正常销售。

透明质酸固体粉末既可以作为化妆品原料，又可以单独作为美容产品进行使用，因此对透明质酸类产品进行微生物限度检测是必要的。根据2015版《化妆品安全技术规范》中的规定，微生物限度检测需要将待检样品与无菌的生理盐水配成1:10的检液，但是这些高粘度的透明质酸类产品在配制检液过程中存在溶解困难、均匀混合时间长的问题，难以溶解至足够的浓度，且配成的检液因为粘稠度比较大很难在检测用微生物培养皿上形成均匀有效的涂布培养，给微生物限度的检测带来很大困难，也影响了结果的准确性。

为了解决上述问题，现阶段可用无菌透明质酸酶对透明质酸类产品进行预先酶解，降低溶液粘度，然后进行微生物限度检测。但是目前报道的透明质酸酶的酶解温度都是在20℃以上，最佳在37℃左右，酶解pH在中性附近，该酶解温度和pH是环境中很多微生物的最佳生长环境，在检测的过程中很容易造成微生物的快速增殖，导致最终测定的结果高于待测样品中实际的菌体含量。目前这一问题还没有引起行业内的足够重视，现有技术中并没有此问题的报道，更没有解决该问题的相关措施和研究。

发明内容

针对现有技术中存在的不足，本发明提供了一种交联或高分子量透明质酸类物质的微生物限度检测方法，该方法在低温弱酸条件下对待检样品进行酶解处理，然后再配制检液，降低了检液的配制难度，所得检液易于在培养基上均匀涂布，且酶解过程中微生物增殖量少，提高了检测结果的准确性，解决了目前的方法无法准确测定微生物限度的难题。

针对目前透明质酸类产品常规使用的酶解温度和pH容易导致微生物大量增殖的问题，发明人进行了研究，发现在低温弱酸的环境下虽然会延长酶解的时间，但是依然能够降低透明质酸类产品的粘度，更为重要的是，该低温弱酸环境不适宜环境中大多数的微生物繁殖，因此在检测时可以较好的维持待检样品中的原始微生物含量，大幅度提高了待检样品微生物限度指标的检测准确性。

本发明具体技术方案如下：