[发明专利]一种检测基于RNAi转基因植物双链RNA的试剂盒及其应用在审
| 申请号： | 202010239571.6 | 申请日： | 2020-03-30 |
| 公开（公告）号： | CN111363840A | 公开（公告）日： | 2020-07-03 |
| 发明（设计）人： | 杨镇州;许丽;刘刚;闻艳丽;杨雪;王乐乐 | 申请（专利权）人： | 上海市计量测试技术研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋 |
| 地址： | 200040 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 基于 rnai 转基因 植物 rna 试剂盒 及其 应用 | ||
1.一种检测基于RNAi转基因植物双链RNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括引物探针组合物；
所述引物包括如SEQ ID NO:1～2所示的核酸序列；
所述探针包括如SEQ ID NO:3所示的核酸序列。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述探针标记有荧光基团和淬灭基团；
优选地，所述荧光基团包括FAM、HEX、TET、JOE、CY3或CY5中的任意一种；
优选地，所述淬灭基团包括MGB、BHQ1、BHQ2或BHQ3中的任意一种。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括反转录试剂和PCR试剂；
优选地，所述反转录试剂包括随机引物、逆转录酶、dNTP或反转录缓冲液中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述PCR试剂包括DNA聚合酶、dNTP或PCR缓冲液中的任意一种或至少两种的组合。
4.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性质控品和/或阳性质控品；
优选地，所述阴性质控品包括非RNAi转基因植物RNA；
优选地，所述阳性质控品包括体外转录的RNAi转基因植物双链RNA。
5.一种检测基于RNAi转基因植物双链RNA的体系，其特征在于，所述体系包括引物探针组合物；
所述引物包括如SEQ ID NO:1～2所示的核酸序列；
所述探针包括如SEQ ID NO:3所示的核酸序列；
优选地，所述引物的终浓度为50～1000nmol/L；
优选地，所述探针的终浓度为10～100nmol/L。
6.根据权利要求5所述的体系，其特征在于，所述体系还包括反转录试剂和PCR试剂；
优选地，所述反转录试剂包括随机引物、逆转录酶、dNTP或反转录缓冲液中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述PCR试剂包括DNA聚合酶、dNTP或PCR缓冲液中的任意一种或至少两种的组合。
7.一种检测基于RNAi转基因植物双链RNA的方法，其特征在于，所述方法包括采用如权利要求1-4任一项所述的试剂盒，或如权利要求5或6所述的体系对样本RNA进行反转录和数字PCR，进行双链RNA的检测；
优选地，所述样本包括基于RNAi转基因玉米。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述反转录的条件为以提取的样本RNA为模板，在反转录酶的作用下合成cDNA第一链。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述数字PCR的条件为96℃10min进行酶激活和预变形；52～60℃下退火2min，98℃保持30s，共40个循环。
10.一种如权利要求1-4任一项所述的试剂盒，或如权利要求5或6所述的体系在制备基于RNAi的转基因植物毒性检测试剂中的应用。
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