[发明专利]一种RNA检测方法

权利要求书

1.一种RNA检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

S1：研钵加液氮3次，加入样品，研磨至粉末，加入Trizol，且使每100mg组织加1ml的Trizol，充分研磨后放在室温下解冻，解冻过程中利用暖风机加速接解冻；

S2：在S1中样品解冻后，将样品放在2-50℃环境下离心10min，使得不溶性物质沉淀，将RNA上清液通过移液枪的吸嘴(3)将RNA上清液吸入之后，再次沿同一方向甩动10-15次，再次用移液枪移入至1.5ml离心管中；在15-30℃下放置5min，使核蛋白复合物完全解离，加入0.2m1氯仿，振荡15sec，室温温浴2-3min，2-8℃离心15min，使得RNA全部溶解于上层水相中，用移液枪把水相移入另一1.5m1离心管中；

S3：在S2中对核蛋白复合物完全解离后，向水相中加0.5m1氯仿，振荡15sec，室温下温浴2-3min；2-8℃下离心15min，把水相用移液枪转入至1.5m1离心管中，并加入0.5ml异丙醇，15-30℃温浴10min；2-8℃下离心10min，使得RNA沉积在离心管的底部及侧壁；

S4：在S3中RNA沉积在离心管的底部及侧壁后，加入1ml75％乙醇，2-8℃温度离心5min，将上清液倒掉，将离心管倒扣在吸水纸上5-10min，每管加30u1的DEPC水，用DEPC水稀释100倍，并用紫外分光光度计测定0D值；

S5：待移液枪使用完毕之后采用清水冲洗之后，利用75％的酒精进行杀毒，随后采用风机进行干燥，干燥完毕后，将手指放置在吸头(4)两端的锁紧杆(6)底端，通过对锁紧杆(6)底端施加压力使得锁紧杆(6)顶端从二号槽口(31)内转出，随后将移液枪的吸嘴(3)底端插入至吸头(4)内部，锁紧杆(6)顶端在转入二号槽口(31)的过程中也对其内部的密封囊(32)进行挤压，使得膨胀的密封囊(32)紧密贴合在吸嘴(3)与吸头(4)之间的间隙里，对吸嘴(3)与吸头(4)内部的空间进行密封；随后将移液枪倒置放入专用的冷藏箱内保存；

其中，S2中使用的所述移液枪包括操作杆(1)、套筒(2)、吸嘴(3)与吸头(4)，所述操作杆(1)位于套筒(2)顶端，所述吸嘴(3)位于套筒(2)底部，所述吸头(4)安装在吸嘴(3)底端；所述吸头(4)顶端的侧壁上设置有一号槽口(41)，所述一号槽口(41)内设有弹性的密封膜(42)；所述吸头(4)外表面对称设有固定块(5)，所述固定块(5)上均用扭簧连接有弧形的锁紧杆(6)，所述锁紧杆(6)顶端与一号槽口(41)位置齐平，所述吸嘴(3)底端的外表面上设置有环形的二号槽口(31)，所述二号槽口(31)内设有一圈密封囊(32)，所述密封囊(32)受力挤压能够发生弹性变形；所述锁紧杆(6)顶端能够转动至二号槽口(31)内部并与之配合锁紧。

2.根据权利要求1所述的一种RNA检测方法，其特征在于：所述锁紧杆(6)顶端设有一号磁铁(61)，所述一号磁铁(61)能够转动至二号槽口(31)内部并与之配合锁紧，所述二号槽口(31)内端的侧壁上设有二号磁铁(33)，所述二号磁铁(33)与一号磁铁(61)磁性相反。

3.根据权利要求2所述的一种RNA检测方法，其特征在于：所述锁紧杆(6)底端一侧的吸头(4)侧面上对称设有限位块(7)，所述限位块(7)侧面至吸头(4)侧面的距离保持在1-2cm。

4.根据权利要求2所述的一种RNA检测方法，其特征在于：所述一号磁铁(61)的形状设置成由内向外半径逐渐增大的圆台状，所述二号槽口(31)的开口形状由内向外逐渐增大，所述一号磁铁(61)能够转动至二号槽口(31)内部并与之配合锁紧。

5.根据权利要求1所述的一种RNA检测方法，其特征在于：所述吸头(4)顶端的内壁上设有自上至下厚度逐渐增大的限位斜板(43)，所述吸嘴(3)底端的外壁上设置有自上至下深度逐渐增大的限位斜槽(34)，所述限位斜板(43)能够插入至限位斜槽(34)内部并与之配合；所述限位斜板(43)设置在一号槽口(41)底端的吸头(4)内壁上，所述限位斜槽(34)的底端与吸嘴(3)底面相通。