[发明专利]蔬菜样品前处理及同时检测其中多种双酚类化合物的方法

说明书

本发明涉及一种蔬菜前处理方法及后续检测其中多种双酚类化合物的方法，通过优化蔬菜前处理方法和液质联用检测方法，实现通过一次前处理过程来同时检测蔬菜的16种双酚类化合物中的一种或多种，且采用等梯度洗脱，检测时间短、灵敏度高、效率高，重现性好。

技术领域

本发明涉及检测领域，尤其涉及一种蔬菜样品前处理及同时检测其中多种双酚类化合物的方法。

背景技术

双酚类化合物属于环境内分泌干扰物，可与人体内的多种核受体结合，即使在低浓度水平下仍会干扰人体和动物等生物体的内分泌系统，影响其生殖和发育。由于消费者的关注以及国家的禁令，制造商已开始从其产品中去除BPA并逐渐转向使用其他双酚化合物(如BPS、BPF、BPAF等)。同时，已有研究表明，与BPA相比，这些BPA替代品具有与BPA相似的雌激素活性和潜在的毒性，如若被暴露于人类生活环境之中，其造成的相关效应也值得关注。双酚类化合物主要暴露途径是通过摄入(食物或灰尘)、吸入(空气或颗粒)和皮肤吸收(纸制品、灰尘或PCP)进入人体，虽然科学家通过体内和体外实验发现了BPs的一些毒性，但迄今为止除了BPA外，其他的BPs还没有用于人体暴露的估计每日暴露剂量或口服最大允许剂量的规定。此外，广泛的环境调查研究发现这类物质在环境和食品基质中污染较为严重，甚至会从环境基质迁移至食品中，并通过食物链进入人体。膳食摄入被认为是人类最主要的化学污染物暴露途径之一，其中蔬菜在全世界居民的膳食组成中一直占有举足轻重的地位。为了研究其他多种双酚类化合物通过蔬菜摄入进入人体对其所造成的影响，为双酚类化合物的安全性评价提供科学数据，首要任务就是精确定量蔬菜中的BPs类物质。

样品分析方法的建立主要包括：采样、提取、净化和上机检测。食品基质由于成分复杂、种类多样，如果样品不经过有效的净化而直接上机检测会产生严重的基质抑制，降低检测方法的灵敏度，同时会对仪器造成损害。因此，对于食品基质，有效的前处理方法十分重要。前处理主要是指提取和净化步骤。对于食品基质常用的提取方法有液液萃取、加速溶剂萃取、凝胶参透色谱(GPC)、基质固相分散萃取以及固相萃取。液液萃取由于具有非选择性，对目标物提取的同时会产生很多共萃物，对于复杂食品的处理效果不佳。加速溶剂萃取技术由于具有良好的提取效率，多形态的提取方式，在一些较难萃取的基质中应用较多。但加速溶剂萃取步骤较为繁琐，时间消耗长，不适合做大批量样品。凝胶色谱技术由于对大分子干扰物(油脂、蛋白、色素)具有良好的去除效果，因此在高油脂、多色素食品中应用较多。但凝胶色谱技术的缺点是有机溶剂消耗过大，对环境容易造成污染。固相萃取技术由于兼具提取和良好的净化作用，并且有机溶剂消耗少，因而被广泛应用于食品基质中双酚类物质的前处理。

目前双酚类化合物检测方法主要有气相色谱质谱联用(GC-MS/MS)、液相色谱以及液相色谱质谱联用(LC-MS/MS)。然而，由于GC-MS检测前往往需要复杂的衍生化前处理，导致其应用受到限制。相比于GC-MS/MS，LC-MS/MS技术在食品中这类化合物的检测运用的更多。

余建龙在《七种双酚类化合物雌激素活性评价及其在食品中检测方法的建立和应用[D]》中利用乙腈超声提取，HLB固相萃取柱和串联Sep-Pak NH2富集净化，超高效液相色谱质谱检测，建立了谷物类食品中5种双酚类化合物的检测方法。该方法具有较高灵敏度和稳定回收率，适用于痕量检测要求，并将此方法成功应用于北京市售12份谷物类食品中的检测。由于蔬菜食品具有高水分和高浓度色素等特点，简单的溶剂萃取很难使样品净化和有效富集。目前关于蔬菜类食品中双酚类化合物的检测方法还未见有报道。

发明内容