[发明专利]一种修复呼吸系统损伤的干细胞条件培养上清液及其制剂

说明书

本发明提供了一种修复呼吸系统损伤的干细胞条件培养上清液，该干细胞条件培养上清液通过以下步骤制备而成：取传达次数为5‑8代的间充质干细胞，去除原培养基，加入与原培养基等量的条件培养基放置于培养箱中，在温度为37.0±0.5℃、CO2浓度为5.0±0.2％、饱和湿度的条件下培养24小时，条件培养基为含工作浓度为0.005‑0.015M的HEPES缓冲盐溶液的无酚红DMEM培养基，收集上清液，离心15‑25min，弃去沉淀，即得干细胞条件培养上清液；本发明提供的干细胞条件培养上清液具有修复呼吸系统损伤的功效。

技术领域

本发明属于中药及干细胞技术领域技术领域，特别涉及一种修复呼吸系统损伤的干细胞条件培养上清液及其制剂。

背景技术

心血管疾病、肿瘤、代谢性疾病和呼吸系统疾病，已经成为威胁全世界的四大慢性疾病，对于前三者，都得到了很好的重视，唯独呼吸系统疾病在老百姓当中的知晓率依然很低，呼吸系统疾病包含：哮喘病、气管炎、支气管炎、慢性阻塞性肺疾病、肺心病、肺结核等，呼吸系统疾病(不包括肺癌)在城市的死亡病因中占第四位(13.1％)，在农村占第三位(16.4％)，由于大气污染、吸烟、工业经济发展导致的理化因子、生物因子吸入、感染性疾病以及人口年龄老化等因素，使近年来呼吸系统疾病如肺癌、支气管哮喘的发病率明显增加，慢性阻塞性肺疾病居高不下(40岁以上人群中超过8％)，从2002年底以来，在中国及世界范围内暴发的传染性非典型肺炎(严重急性呼吸综合征，SARS，COVID-19)疫情，由于多发生于中青年，其传染性强，病死率高，又缺乏针对性的药物，目前在多个国家出现的人禽流感病死率超过60％。而禽流感病毒侵人体内主要的靶器官也是肺，这正说明呼吸系统疾病对中国人民健康危害仍是很大的，其防治任务艰巨。

相较西医对症治疗的方式，中医、生物治疗已成为治疗慢性、损伤性疾病的新策略，能起到修复受损细胞结构及功能的作用，因此我们将结合中药有效成分和生物治疗，制备一种修复呼吸系统损伤的制品。

发明内容

为了解决以上技术问题，本发明提供了一种修复呼吸系统损伤的干细胞条件培养上清液，该干细胞条件培养上清液通过以下步骤制备而成：取传达次数为5-8代的间充质干细胞，去除原培养基，加入与原培养基等量的条件培养基放置于培养箱中，在温度为37.0±0.5℃、CO2浓度为5.0±0.2％、饱和湿度的条件下培养24小时，条件培养基为含工作浓度为0.005-0.015M的HEPES缓冲盐溶液的无酚红DMEM培养基，收集上清液，离心15-25min，弃去沉淀，即得干细胞条件培养上清液。

优选地，去除原培养基后使用0.9％氯化钠注射液清洗，然后再加入条件培养基培养。

进一步地，间充质干细胞传代及上清收获时的细胞密度均在90％以上。

其中，间充质干细胞包括所有间充质干细胞，如脐带间充质干细胞；本发明提供的方法制备的干细胞条件培养上清液能够调节免疫，针对过度炎症反应有显著调节作用，同时也能起到修复损伤、抗衰老的作用，因此上清液本身能够起到修复呼吸系统损伤的作用，既可单独使用，也可以与其他活性成分合用，也可以与辅料制备其他剂型使用，使用以上方法制备的干细胞条件培养上清液中含有多种活性成分：包括TSG-6、HGF、GM-CSF、KGF、VEGF、血管生成素-1(Ang-1)、前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素-10(IL-10)等多种细胞因子，MSC还通过释放大量的细胞外小囊泡(EV)参与肺组织的修复，这些囊泡包裹着细胞因子、生长因子、信号脂质、功能性mRNA和microRNAs，这些有效成分均会随着培养过程释放到条件培养上清液中。

本发明还提供了一种由修复呼吸系统损伤的干细胞条件培养上清液和附加成分制成的鼻咽喷雾敷剂，附加成分主要包括人参与黄芪的混合提取物和生理盐水，干细胞条件培养上清液和人参与黄芪的混合提取物在生理盐水中的体积浓度分别为8％-10％、1％-4％。