[发明专利]一种重组蛋白的制备方法

说明书

本发明适用于生物技术领域，提供了一种重组蛋白的制备方法，其包括以下步骤：将重组蛋白的表达工程菌株进行活化培养，得到活化菌落；将所述活化菌落依次进行一级培养和二级培养，得到二级种子；将所述二级种子置于发酵培养基中进行发酵培养，得到发酵液；将所述发酵液进行离心处理，收集菌体；将所述菌体进行冻存后，再置于裂解液中进行裂解，然后经离心处理，得到以包涵体形式存在的重组蛋白；所述裂解液包括以下组分：三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸、聚乙二醇辛基苯基醚。该制备方法能够使菌体在自然条件下自行破碎，其不仅可以使得到的包涵体的蛋白完全不受外力的破坏，而且还可以使菌体的破碎率达到95%。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种重组蛋白的制备方法。

背景技术

目前，重组蛋白一般是通过对大肠杆菌等表达工程菌株进行发酵培养和诱 导表达而获得的。其中，传统重组蛋白的制备方法，往往需要通过超声破碎机 或高压匀浆机等菌体破碎设备对发酵诱导后的菌体进行破碎，才能获得以包涵 体形式存在的重组蛋白。

然而，传统重组蛋白的制备方法得到的包涵体存在破碎率较低的问题，而 且由于受外力影响，其还存在蛋白容易被损坏的问题，因此，目前亟待寻找一 种新的重组蛋白的制备方法。

发明内容

本发明实施例的目的在于提供一种重组蛋白的制备方法，旨在解决背景技 术中提出的问题。

本发明实施例是这样实现的，一种重组蛋白的制备方法，包括以下步骤：

将重组蛋白的表达工程菌株进行活化培养，得到活化菌落；

将所述活化菌落依次进行一级培养和二级培养，得到二级种子；

将所述二级种子置于发酵培养基中进行发酵培养，得到发酵液；

将所述发酵液进行离心处理，收集菌体；

将所述菌体进行冻存后，再置于裂解液中进行裂解，然后经离心处理，得 到以包涵体形式存在的重组蛋白；每升所述裂解液包括以下组分：三羟甲基氨 基甲烷10～50mmol、乙二胺四乙酸2～10mmol、聚乙二醇辛基苯基醚0.005～0.02 L。

作为本发明实施例的一种优选方案，所述将重组蛋白的表达工程菌株进行 活化培养，得到活化菌落的步骤，具体包括：

将重组蛋白的表达工程菌株的浓度稀释至(10³～10⁴)个/mL后，再涂布于LB 固体琼脂培养皿上，并置于35～38℃的恒温条件下进行活化培养，得到活化菌落。

作为本发明实施例的另一种优选方案，所述一级培养的方法包括以下步骤：

挑取所述活化菌落接种到LB液体培养基中，并置于35～38℃的温度下进行 震荡培养，得到一级种子；

所述二级培养的方法包括以下步骤：

挑取所述一级种子接种到LB液体培养基中，并置于35～38℃的温度下进行 震荡培养，得到二级种子。

作为本发明实施例的另一种优选方案，每升所述发酵培养基包括以下组分： 甘油5～10g、NaCl 5～15g、蛋白胨10～20g、酵母粉10～20g。

作为本发明实施例的另一种优选方案，所述将所述二级种子置于发酵培养 基中进行发酵培养，得到发酵液的步骤，具体包括：

在35～38℃温度下，将所述二级种子置于发酵培养基中进行发酵培养至OD 600为2～10后，再添加诱导剂进行诱导培养，然后降温至4～10℃进行维持培养， 得到发酵液。

作为本发明实施例的另一种优选方案，所述步骤中，发酵培养的溶氧量控 制在40％以上。