[发明专利]一种重组蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种重组蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将重组蛋白的表达工程菌株进行活化培养，得到活化菌落；

将所述活化菌落依次进行一级培养和二级培养，得到二级种子；

将所述二级种子置于发酵培养基中进行发酵培养，得到发酵液；

将所述发酵液进行离心处理，收集菌体；

将所述菌体进行冻存后，再置于裂解液中进行裂解，然后经离心处理，得到以包涵体形式存在的重组蛋白；每升所述裂解液包括以下组分：三羟甲基氨基甲烷10~50mmol、乙二胺四乙酸2~10mmol、聚乙二醇辛基苯基醚0.005~0.02L。

2.根据权利要求1所述的一种重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述将重组蛋白的表达工程菌株进行活化培养，得到活化菌落的步骤，具体包括：

将重组蛋白的表达工程菌株的浓度稀释至(10³~10⁴)个/mL后，再涂布于LB固体琼脂培养皿上，并置于35~38℃的恒温条件下进行活化培养，得到活化菌落。

3.根据权利要求1所述的一种重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述一级培养的方法包括以下步骤：

挑取所述活化菌落接种到LB液体培养基中，并置于35~38℃的温度下进行震荡培养，得到一级种子；

所述二级培养的方法包括以下步骤：

挑取所述一级种子接种到LB液体培养基中，并置于35~38℃的温度下进行震荡培养，得到二级种子。

4.根据权利要求1所述的一种重组蛋白的制备方法，其特征在于，每升所述发酵培养基包括以下组分：甘油5~10g、NaCl 5~15g、蛋白胨10~20g、酵母粉10~20g。

5.根据权利要求1所述的一种重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述将所述二级种子置于发酵培养基中进行发酵培养，得到发酵液的步骤，具体包括：

在35~38℃温度下，将所述二级种子置于发酵培养基中进行发酵培养至OD600为2~10后，再添加诱导剂进行诱导培养，然后降温至4~10℃进行维持培养，得到发酵液。

6.根据权利要求5所述的一种重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤中，发酵培养的溶氧量控制在40%以上。

7.根据权利要求1所述的一种重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤中，冻存的温度为-80~-20℃。

8.根据权利要求1所述的一种重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤中，裂解的温度为15~30℃。

9.根据权利要求1所述的一种重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述诱导剂为异丙基-β-D-硫代半乳糖苷。