[发明专利]适用于金黄色葡萄球菌基因组的试剂盒提取方法

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种适用于金黄色葡萄球菌基因组的试剂盒提取方法。适用于金黄色葡萄球菌基因组的试剂盒提取方法，其特征在于：用生理盐水对金黄色葡萄球菌洗涤，在生理盐水中对该菌体进行沸水浴处理，再采用溶菌酶对菌体裂解处理，溶菌酶处理的时间大于或等于12h，然后用天根试剂盒进行基因组的提取。采用本发明的方法对金黄色葡萄球菌基因组进行提取，能显著的提高金黄色葡萄球菌的破壁效果，达到提高基因组浓度的目的。并且通过本发明的方法，使得金黄色葡萄球菌基因组浓度显著提高，A260/A280和A260/A230的值达到了1.8~2.0，符合标准物质的要求。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种适用于金黄色葡萄球菌基因组的试剂盒提取方法。

背景技术

食源性病原菌是可以引起食物中毒或以食品为传播媒介的致病性细菌，威胁着人类的健康，能引起严重的食品安全问题。食品致病菌种类较多，常见的有致泻大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和单增李斯特氏菌等。建立准确、灵敏、快速、特异性的检测方法用于食品致病菌的检测，对预防和控制食品微生物食物中毒事件的发生有着重要的作用。

以上的病菌中，金黄色葡萄球菌也是引起食物中毒的重要病原菌，也是个世界性卫生难题。在当下微生物污染引起的疾病暴发模式也从局部范围集中式小暴发向全社会范围以散点病例组成的大暴发转变，为有效识别大暴发，快速准确的食品病原菌检测方法迫在眉睫。

传统培养法耗时长，已不能满足目前食源性病原菌的检测。因此目前发展形成了多种快速检测方法，这些方法主要是基于分子生物学的聚合酶链反应PCR法、环介导等温扩增法和基于免疫学的快速检测方法-酶联免疫吸附法等。目前基于分子生物学最常用的有普通PCR法、荧光定量PCR法和近年来兴起的数字PCR法等。这些检测方法的共同点是需要DNA标准物质作为反应的模板，模板可以为病原菌的基因组DNA或者是携带特征毒力基因的质粒DNA。DNA属于生物标准物质，生物标准物质不同于其它标准物质，具有生物活性等特点。目前，食品微生物类参考物质在全球范围内整体较为匮乏，同时由于生物安全问题，这些参考物质在国际共享过程中出现许多困难。因此建立食源性微生物检测即用型基因组核酸标准物质，将解决食品微生物检测核酸参考物质缺失这一关键问题。

发明内容

为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种能有效的提高金黄色葡萄球菌的破壁效果，达到提高基因组浓度的目的的适用于金黄色葡萄球菌基因组的试剂盒提取方法。

革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌分别按照OMEGA和天根的试剂盒提供的标准提取方法提取的基因组浓度均不高，并且天根试剂盒提取的基因组A260/A230比值较低，为1.2。这可能是由于革兰氏阳性菌细胞壁结构较为复杂，难以破壁，导致提取的基因组浓度较低。

本发明以4种常见的食源性病原菌作为研究对象，结合国产天根细菌基因组提取试剂盒，针对不同的菌株，相应地改进了细菌基因组的提取方法，使4种食源性病原菌的基因组样品均符合核酸标准样品的质量要求，为后期大量制备奠定了基础，对于食品检测具有非常重要的意义。

适用于金黄色葡萄球菌基因组的试剂盒提取方法，最核心的步骤是，适用于金黄色葡萄球菌基因组的试剂盒提取方法，其特征在于：用生理盐水洗涤金黄色葡萄球菌菌体，然后在生理盐水中对该菌体进行沸水浴处理，冷却至室温，再采用溶菌酶对菌体进行裂解，溶菌酶处理的时间大于或等于12h，然后用天根试剂盒进行基因组的提取。

上述的金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌。

溶菌酶处理的时间达到12h时，沸水浴处理的时间为3～7min；优选的为5min。

生理盐水洗涤后，金黄色葡萄球菌基因组浓度为193.3ng/μL，且A260/A280和A260/A230的值均在1.8～2.0之间。

上述的适用于金黄色葡萄球菌基因组的试剂盒提取方法，包括以下的步骤：