[发明专利]适用于金黄色葡萄球菌基因组的试剂盒提取方法

权利要求书

1.适用于金黄色葡萄球菌基因组的试剂盒提取方法，其特征在于：用生理盐水洗涤金黄色葡萄球菌菌体，然后在生理盐水中对该菌体进行沸水浴处理，冷却至室温，再采用溶菌酶对菌体进行裂解，溶菌酶处理的时间大于或等于12h，然后用天根试剂盒进行基因组的提取。

2.如权利要求1所述的适用于金黄色葡萄球菌基因组的试剂盒提取方法，其特征在于：所述的金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌。

3.如权利要求1所述的适用于金黄色葡萄球菌基因组的试剂盒提取方法，其特征在于：溶菌酶处理的时间达到12h时，金黄色葡萄球菌基因组浓度为66.1~113.3 ng/µL，且A260/A280和A260/A230的值均在1.7~2.0之间。

4.如权利要求1所述的适用于金黄色葡萄球菌基因组的试剂盒提取方法，其特征在于，金黄色葡萄球菌基因组浓度为193.3ng/µL，且A260/A280和A260/A230的值均在1.8~2.0之间。

5.如权利要求1所述的适用于金黄色葡萄球菌基因组的试剂盒提取方法，其特征在于，沸水浴处理的时间为3~7min。

6.如权利要求1所述的适用于金黄色葡萄球菌基因组的试剂盒提取方法，包括以下的步骤：

（1）取出甘油管保存的菌株，快速解冻，以1%的接种量接种到已灭菌的BHI肉汤培养基中，置于37℃摇床培养12 h；

（2）培养过夜的金黄色葡萄球菌菌悬液离心弃上清后，用生理盐水洗涤金黄色葡萄球菌菌体，然后对该菌体进行沸水浴处理5min，冷却至室温，再采用溶菌酶对菌体进行裂解12h以上，最后用天根试剂盒进行基因组的提取。

7.如权利要求1所述的适用于金黄色葡萄球菌基因组的试剂盒提取方法，包括以下的步骤：

（1）取出甘油管保存的菌株，快速解冻，以1%的接种量接种到已灭菌的BHI肉汤培养基中，置于37℃摇床培养12 h；

（2）将培养好金黄色葡萄球菌菌悬液离心弃上清后，用生理盐水洗涤金黄色葡萄球菌菌体3次，然后取该菌体置于生理盐水中进行沸水浴处理3~7min，冷却至室温，加入105~115µl缓冲液、65~75 µl溶菌酶溶液，于35~39℃下处理10~14 h；加入3.5~4.5 μl 浓度为100mg/ml 的RNase A溶液，振荡12~18s，室温放置3~7 min；

（3）向（2）中的溶液加入蛋白酶K溶液、缓冲液GB混匀后于65~75ºC下放置8~12min，加无水乙醇，充分振荡混匀12~18 s；将全部的溶液加入离心柱中离心后弃流出液；经过漂洗、洗脱后得到细菌基因组DNA。

8.如权利要求1所述的适用于金黄色葡萄球菌基因组的试剂盒提取方法，其特征在于，（2）中，加入110 µl缓冲液、70 µl溶菌酶溶液，于37℃下处理12 h；

所述的缓冲液为20 mM Tris, pH 8.0；2 mM Na2-EDTA；1.2% Triton；

溶菌酶溶液的浓度为50 mg/ml。

9.如权利要求1所述的适用于金黄色葡萄球菌基因组的试剂盒提取方法，其特征在于，

（3）向（2）中的溶液加入蛋白酶K溶液、缓冲液GB混匀后一直于70ºC下放置10min，加无水乙醇，充分振荡混匀15s；将全部的溶液加入离心柱中离心后弃流出液；经过漂洗、洗脱后得到细菌基因组DNA。

10.如权利要求1所述的适用于金黄色葡萄球菌基因组的试剂盒提取方法，包括以下的步骤：

（1）取出甘油管保存的菌株，快速解冻，以1%的接种量接种到已灭菌的BHI肉汤培养基中，置于37℃摇床培养12 h；

（2）将培养好金黄色葡萄球菌菌悬液离心弃上清后，用生理盐水洗涤金黄色葡萄球菌菌体3次，然后取该菌体置于生理盐水中进行沸水浴处理5min，冷却至室温，加入110 µl缓冲液、70 µl溶菌酶溶液，于37℃下处理12h；加入4 μl 浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液，振荡15s，室温放置5min；

（3）向（2）中的溶液加入蛋白酶K溶液、缓冲液GB混匀后于70ºC下放置10min，加无水乙醇，充分振荡混匀15s；将全部的溶液加入离心柱中离心后弃流出液；经过漂洗、洗脱后得到细菌基因组DNA。