[发明专利]一种利用转基因斑马鱼评价药物抗阿尔茨海默症药效的方法

说明书

本发明公开了一种利用转基因斑马鱼评价药物抗阿尔茨海默症药效的方法，具体特征在于，构建转基因阿尔茨海默症斑马鱼药物筛选模型，以幼鱼为研究对象，将其置于特定药物特定浓度的溶液中培养，通过分析幼鱼行为轨迹，检测阿尔茨海默症相关生化指标和研究脑病理形态，初步判断药物是否具有抗阿尔茨海默症的效果。鉴于斑马鱼这种模式生物的多重优势，此方法可以快速高效的对药物是否具有抗阿尔茨海默症效果进行初步评价，进而推动药物开发和上市。

技术领域

本发明涉及药物筛选技术领域，具体涉及一种利用转基因斑马鱼评价药 物抗阿尔茨海默症药效的方法。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是一种严重的神经退行性疾 病，主要好发于65岁以上的老年人群，其特征是神经原纤维缠结和出现老 年斑聚集，同时伴有神经元丢失和认知下降。根据一份报告显示，到2050 年全球被确诊为AD的人数将达到1.3亿。因此，开发有效的AD药物迫在 眉睫。尽管在过去的几十年里科学家们对AD进行了大量的研究，但AD的 完整机制仍然难以阐明。鉴于AD病因的复杂性，一个良好的动物模型对于 AD的研究至关重要。

现有的AD模型以大、小鼠模型为主，但存在病理模拟性差、造模时间 长、重复性低和价格高等缺陷，不能完全满足AD研究需求。研究发现，斑 马鱼(Danio Rerio)大脑的神经解剖学和神经化学途径与人脑表现出了极大 的相似性，同时它们之间的生理、情感和社会行为模式的相似性也得到了很 好的确立。因此，斑马鱼正在成为人类神经疾病研究的一个日益成功的模型。 同时，目前的药物研发周期长，费用高昂，缺少快速初步评价药物抗AD效果的评估方法，因此，建立一种简便、高效、重复性高的高通量评价药物抗 AD效果的方法将大大减少前期人力物力的投入和消耗，缩短研发周期，进 一步推动抗AD药物的研究和开发。

中国专利文献CN108935231A(申请号CN201810724850.4)公开了一种 斑马鱼老年疾呆模型的建立方法及应用，将斑马鱼放入水培养液和葡萄糖培 养液中交替培养，每种培养液培养22～26小时，共培育50～60天，然后将 得到的斑马鱼在葡萄糖培养液与冈田酸培养液中交替培养，每种培养液培养 22～26小时，共培育6～10天。在该发明中，总培育造模时间长达2个月， 同时每天均需进行转移操作，十分不便，过长的造模时间增加了外在因素的 影响，同时增加了人力物力消耗。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种利用转基因斑马鱼评价药物抗阿 尔茨海默症药效的方法，可以快速高效的对药物是否具有抗阿尔茨海默症效 果进行评价。

本发明技术方案如下：

一种利用转基因斑马鱼评价药物抗阿尔茨海默症药效的方法，包括以 下步骤：

(1)转基因斑马鱼的构建

首先构建含有阿尔兹海默症相关基因序列的目标载体，再通过斑马鱼胚 胎显微注射得到荧光标记该基因的转基因斑马鱼模型，将阳性胚胎(显示绿 色荧光)培养至成鱼，即为F₀代转基因斑马鱼；

(2)转基因斑马鱼胚胎的培养

将转基因斑马鱼配种后，收集受精鱼卵，去除死卵和杂质，置于培养皿 中，加入胚胎培养液后放入恒温培养箱中进行培养，得到转基因的斑马鱼幼 鱼；

(3)分组与给药

选择斑马鱼幼鱼，设置野生型对照组(WT)、转基因组和药物不同浓度 处理组，其中，野生型对照组采用野生型的斑马鱼幼鱼维持在斑马鱼系统循 环水中，转基因组采用转基因的斑马鱼幼鱼维持在斑马鱼系统循环水中，药 物不同浓度处理组采用转基因的斑马鱼幼鱼暴露于不同浓度的药物溶液中， 当使用斑马鱼系统循环水以外的溶媒溶解药物，则增设溶媒组，溶媒组暴露 于对应浓度的溶媒中；

(4)行为轨迹分析