[发明专利]一种印迹脂肪酶及其应用

权利要求书

1.一种用发酵法制备高光学纯度L-乳酸的方法，包括将产乳酸的菌种进行发酵，在无氧发酵过程中加入分子印迹化交联酶聚体和乙醇，使得所述分子印迹化交联酶聚体中的印迹脂肪酶特异性催化发酵液中的L-乳酸与乙醇反应得到L-乳酸乙酯，发酵结束后将发酵液中的菌体去除，再将去除菌体后的发酵液通过溶剂萃取提取L-乳酸乙酯，通过反应精馏水解L-乳酸乙酯得到高光学纯度L-乳酸；

所述分子印迹化交联酶聚体的制备是采用交联酶聚体技术对印迹脂肪酶进行固定，包括在印迹脂肪酶的溶液中加入交联剂SMCC，混匀，离心得到沉淀分子印迹化交联酶聚体的步骤；

所述印迹脂肪酶的制备包括以高光学纯度L-乳酸作为印迹模板对脂肪酶进行生物印迹的步骤，其中所述高光学纯度L-乳酸的光学纯度为99.5％以上。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述菌种为乳酸杆菌(Lactobacillus)属的嗜热乳杆菌(Lactobacillus thermophilus)、瑞士乳杆菌(Lactobacillushelveticus)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)，凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)，大肠杆菌(Escherichia coli)，乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)或粪肠球菌(Enterococcus faecalis)。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：基于发酵液的体积，所述分子印迹化交联酶聚体的添加量为0.5-5g/100ml。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于：所述发酵包括先有氧发酵之后再无氧发酵的步骤；

所述有氧发酵和无氧发酵的发酵培养基的组成为：葡萄糖50-200g/L，酵母浸粉0.5-5g/L，磷酸二氢钾2-10g/L，磷酸氢二铵2-10g/L，硫酸镁0.2-0.8g/L，氯化钙0.1-0.8g/L，氯化锌0.01-0.02g/L，余量为水；

所述有氧发酵过程中，通风量为1.0-5.0vvm，搅拌速率为200-250rpm，发酵时间为12-20小时；

所述无氧发酵过程中关闭通风，向发酵体系中加入终浓度为50-200g/L的葡萄糖，加入所述分子印迹化交联酶聚体，采用流加葡萄糖溶液的方式进行碳源补料，并向发酵液中同时流加无水乙醇，使得所述分子印迹化交联酶聚体中的印迹脂肪酶特异性催化发酵液中的L-乳酸与乙醇反应得到L-乳酸乙酯；

所述流加葡萄糖溶液为以3g/h-5g/h流加40g/100ml的葡萄糖溶液；

所述无水乙醇的流加速率为葡萄糖溶液流加速率的90％。

5.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于：所述生物印迹包括将所述脂肪酶溶解在缓冲液中，加入所述高光学纯度L-乳酸作为印迹模板，混匀，冷冻后冻干，再加入碳原子数为1-4的醇洗涤除去印迹模板，同时沉淀得到印迹脂肪酶的步骤。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述脂肪酶与所述高光学纯度L-乳酸的质量比为1:5-3:1。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述脂肪酶与所述缓冲液的质量体积比为10mg:1ml-50mg:1ml。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述碳原子数为1-4的醇与所述缓冲液的体积比为5:1-10:1。