[发明专利]一种高纯度安丝菌素的制备方法

说明书

本发明属于工业微生物技术领域，具体涉及一种高纯度安丝菌素的制备方法。本发明的高纯度安丝菌素的制备方法，包括以下步骤：对安丝菌素发酵液进行预处理，之后加入助滤剂压滤得到菌丝渣；用极性溶剂对菌丝渣进行浸提，过滤，得到浸提液；浓缩除去浸提液中的溶剂，得浓缩液，然后加入不相溶于水的萃取剂进行萃取；将萃取出的有机相依次进行浓缩、降温结晶，得到安丝菌素粗品A；将粗品A用混合溶剂结晶得到粗品B，所述混合溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷中的任意一种与正己烷、正庚烷中的任意一种的组合；用极性混合溶剂对粗品B进行结晶，得到晶体C，干燥即得高纯度安丝菌素成品。本发明方法得到的安丝菌素纯度达到92％以上。

技术领域

本发明属于工业微生物技术领域，具体涉及一种高纯度安丝菌素的制备方法。

背景技术

安丝菌素(Ansamitocin，结构如式1所示)是一种美登素类(Maytansinoid)抗生素，主要是从微生物比如橙色珍贵束丝放线菌(ActinosynnemapretiosumATCC31565)发酵生产或高等植物中分离获得，具有抗肿瘤、抗结核杆菌、抗细菌等多种药理活性。

Higsahide等人在1977年从诺卡氏菌C-15003的发酵液中分离出的一种新的有潜在抗癌活性的安莎霉素，组分按C-3连接不同长度的碳链，可分为P-0、P-1、P-2、P-3、P-3'、P-4和P-4'，其中连接异丁基的安丝菌素P-3(AP-3)的活性最强，在所有发酵产生的安丝菌素中产量也较高，所以安丝菌素P-3常作为发酵的目标产物，其能通过阻碍微管形成从而阻止细胞的有丝分裂使细胞死亡，在体外及荷瘤动物中具有显著的抗肿瘤作用。

安丝菌素P-3是抗肿瘤药DM1的化学前体。DM1是一种叫做美登醇的化疗药物经过化学修饰合成后的一种化学小分子，DM1可以通过连接分子(linker)与具有靶向性的抗体偶联，制备成具有靶向性的抗肿瘤药物，减少化疗的副作用，并增强疗效。罗氏公司用于治疗乳腺癌的新药T-DM1(trastuzumab-DM1,曲妥珠单抗-DM1)即抗体药物赫赛汀-DM1的偶联药物，在晚期乳腺癌患者身上使用可使肿瘤生长发展时间比拉帕替尼推迟3.2个月。

目前，关于安丝菌素的文献多为发酵工艺类报道，少数关于分离纯化的文献所述方法也较为模糊或工艺太过复杂，偏向于少量样品制备，不适于大规模生产。如CN102731526A、CN102732581A和US7432088所述方法需要用到正相硅胶层析或中压反向硅胶层析；而US6573074B2和US20020015984采用全发酵液萃取，消耗溶剂量太大，且萃取前需要将发酵液加热至75℃，会导致萃取溶剂大量挥发污染环境和增加操作风险。

因此，本领域急需找到一种提高产品的收率和纯度的同时，降低生产成本、操作步骤简单且对环境较为友好的纯化方法，以克服上述现有技术中存在的缺陷，满足工业化生产的需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高纯度安丝菌素的制备方法，该方法得到的安丝菌素同时具有较高的纯度和收率。

为实现上述目的，本发明的技术方案是：

一种高纯度安丝菌素的制备方法，包括以下步骤：

1)对安丝菌素发酵液进行预处理，之后加入助滤剂压滤得到菌丝渣；

2)用极性溶剂对步骤1)中的菌丝渣进行浸提，过滤，得到浸提液；

3)浓缩除去步骤2)浸提液中的溶剂，得浓缩液，然后向浓缩液中加入不相溶于水的萃取剂进行萃取；

4)将萃取出的有机相依次进行浓缩、降温结晶，得到安丝菌素粗品A；

5)将步骤4)中的粗品A用混合溶剂结晶得到粗品B，所述混合溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷中的任意一种与正己烷、正庚烷中的任意一种的组合；