[发明专利]一种川丹参茎尖脱毒种苗快速繁育方法

说明书

本发明公开了一种川丹参茎尖脱毒种苗快速繁育方法，包括：步骤1，材料选取与处理；步骤2，材料消毒；步骤3，无菌茎尖剥取与培养；步骤4，病毒检测与脱毒株系建立；步骤5，脱毒株系扩大增殖；步骤6，脱毒苗壮苗生根；步骤7，脱毒苗炼苗与移栽。本发明公布的方法不经历愈伤组织途径的脱分化‑再分化过程，能够快速培育出大量优质的未携带病毒的川丹参种苗，降低川丹参种苗培育时间，保证了川丹参优良性状的遗传稳定，优化的培养基组成大大提高了川丹参无菌脱毒茎尖的存活率以及种苗的繁殖系数，可实现种苗快速获取，快速扩大增殖，从而满足市场对优质川丹参种苗的大量需求。

技术领域

本发明涉及苗木繁育领域，尤其涉及一种川丹参茎尖脱毒种苗快速繁育方法。

背景技术

丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)属唇形科(Lamiaceae)鼠尾草属(Salvia L.)的多年生药用植物，以根及根茎入药，具有祛瘀止痛、活血通经、消肿止痛，静心除烦等功效。现代研究发现，丹参酮类及丹酚酸类化合物是其主要药用化学成分。在临床上，丹参及其药物制品广泛应用于治疗冠心病、心绞痛等心血管疾病。丹参主产于四川、山东、陕西等地，其中川产丹参(川丹参)因根中高含量的酚酸类成分，是优质丹参药源。

近些年，川丹参种植面积和产量均呈上升趋势，同时病毒病危害也正在加剧。目前据报道常见的侵染植物的病毒，即黄瓜花叶病毒(CMV)，烟草花叶病毒(TMV)，芋花叶病毒(DSMV)以及大豆花叶病毒(SMV)等。植物病毒可侵入包括根在内的所有营养器官。川丹参通常只开花不结实，传统繁殖方式为分根无性繁殖。持续的分根栽培导致植株体内病毒、病虫积累，植物正常的生理机能被扰乱，生活力降低，有效成分合成减少，川丹参品种质量日渐退化。因此，培育无病毒健康川丹参植株，探索川丹参脱毒苗繁育体系对减少病毒、病虫害对川丹参植株的影响，保持川丹参的优良品质，具有重要意义。White和Limasset分别用感染烟草花叶病毒的番茄根和烟草茎研究，发现植物根尖和茎尖等顶端分生组织不带病毒，存在一个无毒区，区域长不超过0.5cm。解决川丹参病毒病危害的有效途径就是进行病毒脱除，脱毒即通过切取茎尖或根尖的无毒区培育，生产脱病毒川丹参种苗，以降低病毒病对川丹参大面积种植带来的危害。

植物组织培养再生有两条不同的途径，分别为直接发生途径和间接发生途径。间接发生方式需要经过愈伤组织阶段，而愈伤组织的诱导产生容易增大植物细胞变异的几率，无法保持植物的遗传稳定性。直接发生途径则无需诱导愈伤组织产生，与间接发生方式相比，其优势在于降低了体细胞变异的概率，缩短了培育完整植株的周期，确保培养的再生植物的遗传稳定。

现有丹参脱毒苗繁育技术中，仍存在一些不足，如茎尖外植体成活率低、繁殖系数低、缺乏直接培养途径，愈伤组织培育易产生变异植株，植株再生培养时间较长，操作程序复杂等，无法满足优质川丹参种苗快速繁殖的需求，且目前没有涉及川丹参茎尖脱毒种苗快速繁育的相关技术。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种新的川丹参茎尖脱毒种苗快速繁育方法。

本发明的技术方案是通过以下内容实现的：

一种川丹参茎尖脱毒种苗快速繁育方法，其特征在于，包括：

步骤1，材料选取与处理：选取川丹参植株并做好标记，切取3～4cm长的顶芽，用软毛刷蘸取洗洁剂对切取的顶芽进行刷洗以除去杂质，再切去完全展开的叶片，在流水下冲洗20min，备用；

步骤2，材料消毒：将经过步骤1处理后的顶芽在超净工作台里使用第一消毒剂浸泡消毒，再使用无菌水清洗数次，然后使用第二消毒剂浸泡消毒，再使用无菌水清洗数次，得到无菌川丹参顶芽；

步骤3，无菌茎尖剥取与培养：将步骤2处理后的无菌川丹参顶芽，在电子显微镜下无菌剥离带1～2个叶原基的茎尖分生区作为无菌外植体，将所述无菌外植体接入初代培养基，获得无菌苗；