[发明专利]一种川丹参茎尖脱毒种苗快速繁育方法

权利要求书

1.一种川丹参茎尖脱毒种苗快速繁育方法，其特征在于，包括：

步骤1，材料选取与处理：选取川丹参植株并做好标记，切取3~4 cm长的顶芽，用软毛刷蘸取洗洁剂对切取的顶芽进行刷洗以除去杂质，再切去完全展开的叶片，在流水下冲洗20min，备用；

步骤2，材料消毒：将经过步骤1处理后的顶芽在超净工作台里使用第一消毒剂浸泡消毒，再使用无菌水清洗数次，然后使用第二消毒剂浸泡消毒，再使用无菌水清洗数次，得到无菌川丹参顶芽；

步骤3，无菌茎尖剥取与培养：将步骤2处理后的无菌川丹参顶芽，在电子显微镜下无菌剥离带1～2个叶原基的茎尖分生区作为无菌外植体，将所述无菌外植体接入初代培养基，获得无菌苗；

步骤4，病毒检测与脱毒株系建立：待无菌苗长至3~4 cm高时，采用ELISA法进行病毒检测，病毒检测合格的无菌苗即为无菌脱毒株系；

步骤5，脱毒株系扩大增殖：在无菌操作台中将步骤4所述的无菌脱毒株系，转入继代培养基进行脱毒苗扩繁，得到大量的无菌脱毒丹参苗；

步骤6，脱毒苗壮苗生根：在无菌操作台中将步骤5中无菌脱毒丹参苗的丛生芽分为单株，并将其接入壮苗生根培养基，实现川丹参脱毒苗的壮苗生根；

步骤7，脱毒苗炼苗与移栽：当脱毒苗根长为6～8cm时，打开培养瓶的瓶盖，对川丹参脱毒苗进行炼苗处理，后使用移栽基质，即可实现脱毒苗移栽；

所述初代培养基包括：MS培养基、0.25~0.5 mg/L 6-苄基嘌呤、0.1~0.15 mg/L α-萘乙酸、0.1 mg/L赤霉素、7.5~9 g/L琼脂和25~30 g/L蔗糖；所述初代培养基的培养条件为：pH=5.9，温度20～22 ℃，光照强度为2500-3500 Lux，光照周期为16 h光照，8h黑暗；

所述继代培养基包括：MS培养基、0.2~0.6 mg/L 6-苄基嘌呤、0.1 mg/L α-萘乙酸、10g/L 琼脂和20 g/L 蔗糖；所述继代培养基的培养条件为：pH=5.9，培养温度20～22 ℃，光照强度为2500～3000 Lux，光照周期为16 h光照，8h黑暗；

步骤2所述的第一消毒剂为75％的乙醇，所述顶芽在75％的乙醇中的浸泡时间为45~60s；步骤2所述的第二消毒剂为0.1%氯化汞溶液，所述顶芽在0.1%氯化汞溶液中的浸泡时间为6 ~8min。

2.如权利要求1所述的一种川丹参茎尖脱毒种苗快速繁育方法，其特征在于，所述壮苗生根培养基包括：MS培养基、0.1~0.3 mg/L 吲哚丁酸、0 .1~0.15 mg/L 激动素、12 g/L 琼脂，10 g/L 蔗糖；所述壮苗生根培养基的培养条件为：pH为5 .8～6.1，培养温度20～24℃，光照强度为2500～3000 Lux，光照周期为18 h光照，6h黑暗。

3.如权利要求1所述的一种川丹参茎尖脱毒种苗快速繁育方法，其特征在于，所述无菌水清洗的次数为2~8次。

4.如权利要求1所述的一种川丹参茎尖脱毒种苗快速繁育方法，其特征在于，步骤3所述茎尖大小为0.1~0.2 cm。

5.如权利要求1所述的一种川丹参茎尖脱毒种苗快速繁育方法，其特征在于，所述移栽基质的体积比为营养土：蛭石：珍珠岩=2:1:2的混合基质。

6.如权利要求1所述的一种川丹参茎尖脱毒种苗快速繁育方法，其特征在于，所述移栽基质的水分含量为70%。