[发明专利]一种冠状病毒核酸检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种冠状病毒核酸检测试剂盒，包括试剂盒本体(1)，其特征在于：所述试剂盒本体(1)内嵌入式设计有收纳块(2)，收纳块(2)内放置有第一试管(3)、第二试管(4)、第三试管(5)和第四试管(6)，第一试管(3)内装有SARS-CoV-2_PCR反应液，第二试管(4)内装有SARS-CoV-2_PCR酶混合液，第三试管(5)内装有SARS-CoV-2阳性质控品，第四试管(6)内装有SARS-CoV-2阴性质控品。

2.根据权利要求1所述的一种冠状病毒核酸检测试剂盒，其特征在于：所述SARS-CoV-2_PCR反应液的组成成分包括dNTPs、MgCL2、Tris-HCL、引物探针和UNG酶。

3.根据权利要求1所述的一种冠状病毒核酸检测试剂盒，其特征在于：所述SARS-CoV-2_PCR酶混合液的组成成分包括Tap DNA聚合酶和逆转录酶。

4.根据权利要求1所述的一种冠状病毒核酸检测试剂盒，其特征在于：所述SARS-CoV-2阳性质控品的组成成分包括阳性模板。

5.根据权利要求1所述的一种冠状病毒核酸检测试剂盒，其特征在于：所述SARS-CoV-2阴性质控品的组成成分包括阴性模板。

6.根据权利要求1～5任一所述的采用冠状病毒核酸检测试剂盒的检测方法，其特征在于：包括准备RNA提取试剂盒、荧光定量PCR仪、涡旋混匀仪、离心机和PCR反应管；

具体步骤为：

第一步，使用RNA提取试剂盒提取新鲜采集的血清、血浆或咽拭子样本中的RNA，且保证提取出的RNA质量和数量满足实验要求，提取出的RNA样品应立即检测或于-70℃以下保存；

第二步，将第一试管(3)、第二试管(4)、第三试管(5)和第四试管(6)进行短暂振荡后，放入离心机内离心数秒，若第一试管(3)、第二试管(4)、第三试管(5)和第四试管(6)在-70℃以下环境保存，需先提前30min将RNA样品取出，待室温融合后，方可进行振荡离心；振荡离心完毕后，确定反应数和需加入SARS-CoV-2_PCR反应液、SARS-CoV-2_PCR酶混合液的量；

第三步，取1.5ml无菌离心管，将SARS-CoV-2_PCR反应液和SARS-CoV-2_PCR酶混合液加入无菌离心管中，使用涡旋混匀仪混匀后，再使用离心机离心数秒，配制混合溶液；

第四步，将配制完的混合溶液以20ul/管分装至PCR反应管内；

第五步，将取5ul SARS-CoV-2阳性质控品、5ul SARS-CoV-2阴性质控品和5ul RNA样品分别加入不同的PCR反应管内，盖紧管盖后使用离心机短暂离心，令管壁上的液体全部甩至管底后，立即将PCR反应管放入荧光定量PCR仪内进行PCR反应；

第六步，在荧光定量PCR仪上选择FAM/TEXAS RED/Cy5通道进行检测冠状病毒，选择VIC/HEX通道进行检测内参基因，选择反应体积为25ul，参考荧光选择None；

第七步，待荧光定量PCR仪检测完毕后，分析数据即可获知进行检测的RNA样品为阴性或阳性，以此判断是否为患病者。

7.根据权利要求6所述的一种采用冠状病毒核酸检测试剂盒的检测方法，其特征在于：所述荧光定量PCR仪使用时包括5个阶段，分别为RNA反转录阶段，设定温度为50℃、时间为30分钟、循环次数为1次；预变性阶段，设定温度为95℃、时间为3分钟、循环次数为1次；变性阶段，设定温度为95℃、时间为15秒，循环次数为40次；退火、延伸、荧光信号采集阶段，设定温度为60℃、时间为30秒、循环次数为40次；仪器冷却阶段，设定温度为25℃、时间为1分钟、循环次数为1次。

8.根据权利要求7所述的一种采用冠状病毒核酸检测试剂盒的检测方法，其特征在于：所述RNA反转录阶段、预变性阶段、变性阶段、退火、延伸、荧光信号采集阶段和仪器冷却阶段的循环次数的比例为1:1:40:40:1。

9.根据权利要求6所述的一种采用冠状病毒核酸检测试剂盒的检测方法，其特征在于：所述RNA提取试剂盒使用名称为QIAamp Viral RNA Mini Kit(52904)或天根生化科技(北京)有限公司的病毒RNA提取试剂盒(DP315-R)。