[发明专利]一种利用自体免疫细胞定向分化为胰岛细胞的方法

说明书

本发明提供一种利用自体免疫细胞定向分化为胰岛细胞的方法，所述方法为从患者外周血获取免疫细胞经体外去分化为诱导多能干细胞，再定向分化生成胰岛细胞。通过本发明中培养胰岛细胞的方法，选取的是自体外周血分离的免疫细胞，进行诱导定向分化为胰岛细胞，然后移植到同一个病人，降低病人的免疫排斥反应，除此之外，不存在组织配型和伦理方面的问题。本发明在诱导多能干细胞（iPSC）定向诱导分化为胰岛细胞时，经过20‑28天的诱导分化，通过DTZ染色鉴定最终诱导的胰岛细胞的纯度为62.4%以上。

技术领域

本发明涉及一种利用自体免疫细胞定向分化为胰岛细胞的方法，属于生物与新医药技术领域。

背景技术

胰腺是分泌胰脂肪酶、胰蛋白酶、弹性酶、胰淀粉酶等消化酶的外分泌腺，也是分泌胰高血糖素、胰岛素、生长抑素、胰多肽等胰腺激素的内分泌腺。胰腺激素是由胰腺中被称为“胰岛”的细胞群分泌的，它包括四种类型的细胞，分别为α细胞、β细胞、δ细胞、 pp细胞。

糖尿病是一种由于胰岛素缺乏或工作不足引起的疾病。这种病一旦在病人身上发生，就很难完全治愈。糖尿病有两种主要类型，胰岛素依赖型的I型糖尿病和胰岛素不依赖型的II型糖尿病。II型糖尿病是一种慢性疾病，是在机体获得胰岛素抵抗时发生的。II型糖尿病也被认为是一种生活方式相关的疾病，是由于不良的生活方式习惯，包括过度饮食或缺乏锻炼引起的肥胖或压力而导致的。II型糖尿病常发生在中老年人群，许多糖尿病患者患有II型糖尿病。

I型糖尿病是由自身免疫性疾病或病毒感染破坏β细胞或胰岛素分泌细胞引起的。胰岛素分泌细胞被破坏，胰岛素不能在体内分泌。I型糖尿病患者用胰岛素作为对症治疗。此外，应用胰腺或胰岛移植，使患者获得自动控制血糖水平的能力。血糖水平经常波动，胰腺或胰岛移植可以减轻患者的负担，可使患者血糖达到正常水平。然而，目前可供移植的胰腺和胰岛数量不足，且接受移植的病人必须终生服用免疫抑制剂，这种药物可能会引起其他副作用。

随着干细胞与组织工程领域的相关研究飞速发展，已有人研究出诱导多能干细胞定向分化为胰腺细胞的方法，并已申请专利，专利号为CN 104726395 B，但此方法还未应用到临床中。而且该专利中利用胚胎干细胞（ESCs）和异体诱导性多能干细胞（iPSCs）定向分化的胰腺细胞可能会引起糖尿病人的免疫排斥作用，同时胚胎干细胞应用到临床还涉及到伦理问题。在现有技术中，还有其他来源获得胰腺细胞，比如CN109053866A中利用表皮干细胞诱导分化为胰腺细胞，但此培养方法中应用了胎牛血清，由于胎牛血清是动物来源的，其含有动物蛋白，不能直接应用于临床。

基于以上问题，急需开发一种高效率利用自体免疫细胞定向分化为胰岛细胞的方法，且该胰岛细胞移植对患者的副作用较小，免疫排斥反应低，不存在伦理问题。

利用自体免疫细胞分化为胰岛细胞，首先需要将自体免疫细胞进行去分化得到iPSC，再定向诱导分化为胰岛细胞，此过程存在细胞培养时间长，转化率低，诱导分化的胰岛细胞的纯度低，胰岛细胞的胰岛素分泌水平低的缺陷。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明提供一种利用自体免疫细胞定向分化为胰岛细胞的方法，实现以下发明目的：

（1）缩短细胞培养时间；

（2）提高转化率，提高诱导分化的胰岛细胞的纯度；

（3）诱导的胰岛细胞胰岛素分泌水平与正常胰腺细胞持平。

为解决上述技术问题，本发明采取以下技术方案：

一种利用自体免疫细胞定向分化为胰岛细胞的方法，所述方法为从患者外周血获取免疫细胞经体外去分化为诱导多能干细胞，再定向分化生成胰岛细胞。

以下是对上述技术方案的进一步改进：

所述诱导多能干细胞，纯度≧95%。