[发明专利]一种血管紧张素转化酶测定试剂盒及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种血管紧张素转化酶测定试剂盒，试剂盒含有试剂R1和试剂R2，试剂R1包含以下组分：N‑三(羟甲基)甲基‑3‑氨基丙磺酸、氯化钠、离子激活剂、聚甘油脂肪酸酯、4‑羟基2,2,6,6‑四甲基‑1‑氧‑哌啶(AAQ‑2)、防腐剂；试剂R2包含以下组分：N‑三(羟甲基)甲基‑3‑氨基丙磺酸、FAPGG、稳定剂、防腐剂。本发明同时提供了该试剂盒的制备方法和应用，该试剂盒是一种抗干扰能力强、稳定性强、重复性好的液体试剂盒。

技术领域

本发明涉及生化试剂测定技术领域，特别涉及一种血管紧张素转化酶测定试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术

血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE，EC3.4.15.1)是一种哺乳动物组织中普遍存在的Zn²+依赖型羧二肽酶，为膜整合的单链糖蛋白，主要存在于肺血管内皮细胞，也可见于子宫、胎盘、心脏、肾、大脑、肾上腺皮质等大多数组织中。通过肾素-血管紧张素系统RAS(rennin-angiotensin system)和激肽释放酶-激肽系统,ACE对血压、电解质和体液平衡、心血管系统发育和结构重塑起重要调节作用。在Zn²⁺存在的条件下，ACE能水解十肽血管紧张素I(angiotensin I,Ang I)中Phe8-His9之间的肽键，产生八肽血管紧张素 II(Ang II)和羧基端的二肽His-Leu。血管紧张素II是目前研究发现最强的收缩血管物质之一，作用于血管紧张素受体1，收缩血管平滑肌，刺激醛固酮分泌，促进人体肾脏对Na⁺、K⁺重吸收，引起钠贮量和血容量的增加，从而导致血压升高，对于心脏具有正性肌力作用和变时作用；同时，ACE还水解血管舒张剂-缓激肽羧基末端两个氨基酸，钝化其扩张血管的生物活性，被称为激肽水解酶2。除了底物血管紧张素I和缓激肽外,ACE还可以水解多种血管活性肽，如脑啡呔、P物质、神经降压素等，体外实验证明其能水解Alzheimer症中过量表达的β淀粉样蛋白。

血清中ACE含量的水平，取决于组织细胞对ACE的合成与释放能力。如果细胞这种功能失调，则影响组织与血液之间ACE含量的动态平衡，引起血清中的ACE含量改变，在临床上对肺部疾病、肝脏疾病、糖尿病、冠心病、心肌梗死等疾病具有诊断意义，血清ACE 可作为临床相关诊断的指标。

早期关于ACE测定多采用荧光光度法、生物学放射层析法、分光光度法，随着对ACE研究的深入，相继建立了高效液相色谱法、放射免疫法、酶偶联法及ACE基因测定法等。

酶偶联法:血清中的ACE作用于底物马尿酸双苷肽，生成马尿酸和双苷肽，再由γ-谷氨酰基转移酶作指示酶催化酶偶联反应，在410nm处测定其吸光度，ACE活性与生成物量呈正比。偶联反应如下：

放免法：此法使用蛋白酶抑制剂Lisinopril、Aprotinin及EDTA结合的放射免疫分析法，但需要特殊仪器，应用不广泛。

分光光度法：利用马尿酸-组氨酸-亮氨酸作为ACE的反应底物，被分解成马尿酸和组氨酸-亮氨酸，马尿酸和氰尿酰氯结合呈淡黄色，通过比色法可计算ACE的活性。

连续监测法：使用呋喃丙烯基丙氨酰甘氨酰甘氨酸(furylacryloyl-phe-Gly-Gly,FAPGG)作为底物测ACE的特异活性。FAPGG被ACE催化水解时，产生吸光度变化，在340nm处测定。此法灵敏度明显改善，参考值范围也被确定。近期国内外资料测定血清(浆)或组织液 ACE活性大多采用FAPGG作底物的试剂，且此法可用于全自动生化分析仪，适合于临床常规检验。但是由于血管紧张素转化酶活性容易受胆红素等因素的抑制，普通的血管紧张素转化酶检测试剂存在重复性不好、抗干扰性能差等缺点。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种血管紧张素转化酶测定试剂盒及其制备方法和应用，该试剂盒是一种稳定性强、抗干扰能力强、重复性好的液体试剂盒。