[发明专利]一种用于检测金葡菌肠毒素sea、seb、sec基因的三重荧光定量PCR试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于检测肠毒素基因sea、seb、sec的荧光定量PCR试剂盒，包括含有Premix ExTaq、引物和探针、阳性质粒及灭菌水，其中，引物、探针序列如SEQ ID No.1‑9所示；所述的探针的5’端标记有报告荧光基团，所述的探针的3’端标记有淬灭荧光基团。本发明还提供了采用上述的试剂盒检测肠毒素基因sea、seb、sec的方法。通过本发明的试剂盒，可以迅速的检测金葡菌肠毒素基因sea、seb及sec，对肠毒素进行分型，为食物中毒的确诊提供依据。

技术领域

本发明属于生物工程领域，涉及一种试剂盒，具体来说是一种用于检测金葡菌肠毒素sea、seb、sec基因的三重荧光定量PCR试剂盒。

背景技术

金黄色葡萄球菌肠毒素是一类结构、毒力相似、抗原性不同的胞外蛋白质，是引起食物中毒的主要因子。据报道，1μg/kg的金葡菌肠毒素便可引起呕吐、腹泻等症状。在《葡萄球菌食物中毒的诊断标准、判定原则和处理原则(WS/T80-1996)》中规定“从中毒食物、患者吐泻物中经培养检出金黄色葡萄球菌，菌株经肠毒素检测证实在不同样品中检出同一型别的肠毒素”，才能判定为肠毒素引起的食物中毒，因此金葡菌肠毒素的分型工作非常重要。对于金黄色葡萄球菌肠毒素的检测，酶联免疫法是应用较多的检测方法，但是免疫学的方法存在很多缺点。随着分子生物学的发展，渐渐开始使用PCR方法对肠毒素基因进行检测。PCR技术具有灵敏度高、特异性强的优点。目前国内外对于肠毒素基因的检测大多采用普通PCR或荧光定量PCR法逐一检测，缺乏快速高效的多重qPCR方法。

发明内容

针对现有技术中的上述技术问题，本发明提供了一种用于检测金葡菌肠毒素sea、seb、sec基因的三重荧光定量PCR试剂盒，所述的这种用于检测金葡菌肠毒素sea、seb、sec基因的三重荧光定量PCR试剂盒要解决现有技术中检测肠毒素基因的试剂盒时间长、程序繁琐、成本太高，不利于大量样本检测的技术问题。

本发明提供了一种用于检测肠毒素基因sea、seb、sec的荧光定量PCR试剂盒，包括

引物和探针，所述的引物、探针序列如下所示：

第一上游引物的序列如SEQ ID No.1所示，

第一下游引物的序列如SEQ ID No.2所示，

第一探针的序列如SEQ ID No.3所示，

第二上游引物的序列如SEQ ID No.4所示，

第二下游引物的序列如SEQ ID No.5所示，

第二探针的序列如SEQ ID No.6所示，

第三上游引物的序列如SEQ ID No.7所示，

第三下游引物的序列如SEQ ID No.8所示，

第三探针的序列如SEQ ID No.9所示，

任意一个所述的探针的5’端标记有报告荧光基团，所述的探针的3’端标记有淬灭荧光基团。

进一步的，所述试剂盒还包括Premix ExTaq、阳性质粒及灭菌水。

本发明还提供了上述的试剂盒检测肠毒素基因sea、seb、sec的的方法，包括如下步骤：

1)先配制qPCR反应液，在每一个qPCR反应体系中，所述的qPCR反应液的体积为22μL，所述的qPCR反应液包括12.5μL 2×浓度的Premix ExTaq、1μL的第一上游引物、1μL第一下游引物、0.5μL第一探针、1μL第二上游引物、1μL第二下游引物、0.5μL第二探针、1μL第三上游引物、1μL第三下游引物、0.5μL第三探针、2μL灭菌双蒸水，任意一个引物和探针的浓度均为10μM；