[发明专利]一种针对个性化叶酸增补的基因分型快速检测方法及其引物组合、试剂盒在审
| 申请号： | 202010191549.9 | 申请日： | 2020-03-18 |
| 公开（公告）号： | CN111363801A | 公开（公告）日： | 2020-07-03 |
| 发明（设计）人： | 崔亚丽;张思浓;惠文利;朱娟莉 | 申请（专利权）人： | 西安金磁纳米生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 西安智邦专利商标代理有限公司 61211 | 代理人： | 胡乐 |
| 地址： | 710077 陕西省西安市高新区*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 针对 个性化 叶酸 增补 基因 快速 检测 方法 及其 引物 组合 试剂盒 | ||
1.特定引物组合在构建针对个性化叶酸增补的基因分型检测产品方面的用途，其特征在于：所述特定引物组合分为三组，分别针对MTHFR C677T、MTHFR A1298C和MTRR A66G这三个SNP位点；对于每个位点均设计四条引物，包括两条外围引物与一条野生型特异性引物及一条突变型特异性引物进行识别与扩增：在两条外围引物的5’端均标记地高辛，野生型特异性引物5’端标记Cy5，突变型特异性引物5’端标记生物素；所述特定引物组合的引物序列具体如下：
MTHFR C677T引物序列：
677(1)(Cy5)5’-GAGAAGGTGTCTGCGGGAGC-3’
677(2)(Dig)5’-CCTCACCTGGATGGGAAAGAT-3’
677(3)(Dig)5’-AGTCCCTGTGGTCTCTTCATCC-3’
677(4)(Bio)5’-GCTGCGTGATGATGAAATCTA-3’
MTHFR A1298C引物序列：
1298(1)(Cy5)5’-GGAGGAGCTGACCAGTGAAGA-3’
1298(2)(Dig)5’-AGCCTGTCTTTGCCTCCCTAA-3’
1298(3)(Dig)5’-AATGGCCTCCTGGGCATGT-3’
1298(4)(Bio)5’-GAACGAAGACTTCAAAGACACATG-3’
MTRR A66G引物序列：
66(1)(Dig)5’-GTGTGGGTATTGTTGCATTGTTTC-3’
66(2)(Cy5)5’-CATGTACCACAGCTTGCTCAAAT-3’
66(3)(Bio)5’-AAGGCCATCGCAGAAGAAAGG-3’
66(4)(Dig)5’-GACTATGTGGTGGTATTAGTGTCC-3’。
2.一种针对个性化叶酸增补的基因分型检测试剂盒，其特征在于，包含有权利要求1中所述的特定引物组合以及金磁微粒层析试纸条。
3.根据权利要求2所述的针对个性化叶酸增补的基因分型检测试剂盒，其特征在于，所述金磁微粒层析试纸条采用具有可目视化特性的金磁微粒作为载体，利用地高辛/地高辛单抗、Cy5/Cy5单抗、生物素/链亲和素间的相互作用，对PCR扩增产物进行SNP基因型分型。
4.根据权利要求3所述的针对个性化叶酸增补的基因分型检测试剂盒，其特征在于，所述金磁微粒层析试纸条满足：
a、试纸条的免疫层析膜上的质控线处包被有质控用生物素；
b、第一检测线处包被有Cy5单抗；
c、第二检测线处包被有链亲和素；
d、结合垫上喷涂有地高辛抗体-金磁微粒；
当PCR产物滴加至试纸条的样品垫后，若PCR产物在第一检测线显色而在第二检测线不显色，则表明基因型为野生型；若PCR产物在第二检测线显色而第一检测线不显色，则基因型为纯合突变型；若PCR产物在两条检测线处均显色，则基因型为杂合突变型。
5.根据权利要求4所述的针对个性化叶酸增补的基因分型检测试剂盒，其特征在于，所述金磁微粒的主体纳米金磁微粒为核壳结构的超顺磁性复合微粒，其核为纳米磁性粒子，核表面是金的壳层，利用表面金的性质，无需共价偶联试剂，能够将地高辛单抗偶联在其表面形成地高辛单抗-金磁微粒。
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